[實用新型]一種用于檢測或治療人子宮內膜癌的試劑盒

有效

• 申請號: 201620583217.4
• 申請日: 2016-06-15
• 公開（公告）號: CN206270347U
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 李翀;史桂芝
• 申請（專利權）人: 李翀
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司11401
• 代理人: 巴曉艷

技術領域

本發明屬于腫瘤免疫學領域。本發明涉及一種新型子宮內膜癌腫瘤標志物GAB31，以及抗GAB31的單克隆抗體EM2D9。細胞和組織學水平證明：EM2D9特異性識別人子宮內膜癌細胞及人子宮內膜癌組織。本發明還涉及一個免疫磁珠法檢測人子宮內膜癌的方法。該檢測方法所檢測的抗原為本發明中的人的子宮內膜癌新型標記物GAB31，檢測抗體為本發明中抗人子宮內膜癌GAB31的單克隆抗體EM2D9。

背景技術

子宮內膜癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，其發病率高居歐美國家女性生殖系統惡性腫瘤首位。相對于歐美國家，發展中國家子宮內膜癌發病率較低，但死亡率較高。隨著我國百姓的生活及飲食習慣趨于西化，尤其是經濟發達地區，子宮內膜癌的發病率正逐年增高，目前居我國女性生殖系統惡性腫瘤的第二位，僅次于宮頸癌，且發病年齡漸趨年輕化。子宮內膜癌的病因至今尚不明確。雖然子宮內膜癌的早期診斷方法有經陰道超聲、子宮內膜活檢、診斷性刮宮、子宮內膜細胞學等諸多方法，但對于在無癥狀的普通人群和危險人群中篩查子宮內膜癌的方法，業內當前尚沒有形成統一的指南或建議。因而，探索子宮內膜癌篩查的策略是當今醫學界子宮內膜癌研究的熱點領域。目前子宮內膜癌的常用診斷方法用于篩查策略，都或多或少有著比較大的缺陷。經陰道超聲無法確定子宮內膜病變時內膜厚度的界值；接受子宮內膜活檢者或多或少有著不適感，而且有相當比例的受檢者因為組織取材量不足導致漏診；診斷性刮宮是有創性操作，納入篩查策略顯然不合適，且受制于醫療水平的原因，非發達地區無法普及；宮腔鏡檢查費用高昂，且單獨運用診斷價值有限；子宮內膜細胞學的特點最接近篩查策略，但是，當前缺乏統一的細胞學標準。可見，子宮內膜癌的篩查策略仍需要進一步的探究。

近年來，腫瘤標志物由于其較高的特異性和靈敏度的特點，對腫瘤的篩查、診斷、分類、預后監測以及治療提供相當大的指導意義。有研究表明CD44參與子宮內膜癌細胞的侵襲和轉移。CD44屬于細胞多功能粘附分子,是單基因編碼的一種跨膜糖蛋白,其廣泛存在于多種細胞和組織。CD44有10個變異外顯子，因而其可以通過選擇性剪切、拼接形成多種異構體,結合細胞表面相應配體,進而能夠調節細胞的多種生理、病理過程。研究表明，CD44分子在多種腫瘤中高表達,并與腫瘤細胞的生長、侵襲、轉移能力以及腫瘤環境中的造血干細胞的歸巢密切相關,并可作為腫瘤干細胞的標志物,或可作為腫瘤篩查、預后判斷及治療的靶點。CD44的生物學功能及表達調控模式因不同條件而異，比如腫瘤種類、生長條件。多種因素可影響其表達,如雌激素受體、轉錄因子等。CD44的異常糖基化修飾可導致腫瘤細胞惡性程度的改變，探究子宮內膜癌中CD44的異常修飾，可為子宮內膜癌的篩查、診斷、預后判斷及治療提供一種新的靶點，對于子宮內膜癌的診斷和治療將具有極其重要的意義。

實用新型內容

本發明從新鮮的人子宮內膜癌組織中提取總蛋白免疫小鼠，制備雜交瘤細胞株。用ELISA的方法篩選到一株能與人子宮內膜癌組織高度特異結合的抗體EM2D9，該抗體屬于IgG1亞類。免疫組織化學證實，EM2D9抗體與人子宮內膜癌組織呈強陽性反應，而與人正常子宮內膜組織無交叉反應。

本發明通過免疫沉淀結合質譜與糖芯片結果鑒定，EM2D9抗體識別的抗原是一種異常糖基化的CD44，其定位于細胞膜上，其表位為：Galb1‐3(Neu5Aca2‐6)GlcNAcb1‐4Galb1‐4Glcb屬于全新的子宮內膜癌標志物。

本發明將EM2D9抗體偶聯納米磁顆粒，制備成抗子宮內膜癌免疫磁珠(EM2D9‐MB)，捕獲并富集脫落的子宮內膜癌細胞，經瑞氏吉姆薩病理涂片染色，在顯微鏡下進行鏡檢診斷。該試劑盒適用于腫瘤病人的早期篩查、預后監測及病理輔助診斷。

本發明的創新性在于：(1)篩選并制備了一種抗人子宮內膜癌的單克隆抗體EM2D9，該抗體與人子宮內膜癌組織呈強陽性反應，而與人正常子宮內膜組織無交叉反應；(2)揭示了EM2D9抗體識別的抗原表位為Galb1‐3(Neu5Aca2‐6)GlcNAcb1‐4Galb1‐4Glcb，為全新的子宮內膜癌標志物；(3)開發了一種基于EM2D9抗體的高靈敏度的用于檢測人子宮內膜癌的免疫磁珠方法。

新型詳述