[發(fā)明專利]一種通過多表位肽段組合的方式檢測特異性抗體的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611253155.1
• 申請日: 2016-12-30
• 公開（公告）號: CN106771246B
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉鎮(zhèn)寧;張曉晨;李家億;李玉敏;溫曉玉;牛俊奇;康新迪;蔡林君;王放
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

本發(fā)明公開了一種通過多表位肽段組合的方式檢測特異性抗體的方法，屬于生物技術(shù)、特異性抗體檢測和疫苗制備領(lǐng)域。本發(fā)明的檢測特異性抗體的方法，使用多表位肽段組合的方式代替全長肽段作為檢測抗原檢測樣本中的特異性抗體。本發(fā)明解決了同一基因型的抗原肽段復(fù)雜多變或者抗原突變株增生，以及大片段多肽合成較困難的現(xiàn)狀。本發(fā)明可避免對于包被抗原肽段選擇的糾結(jié)性，減少大片段抗原肽段的合成，并提高檢測結(jié)果的靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種通過多表位肽段組合的方式檢測特異性抗體的方法，屬于生物技術(shù)、特異性抗體檢測和疫苗制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒感染所致。HBV顆粒由乙肝表面抗原(HBsAg)和來自宿主的脂質(zhì)組成，是直徑約為42nm的球形結(jié)構(gòu)。HBsAg包括3種被膜糖蛋白，即大蛋白(LHBs)、中蛋白(MHBs)和小蛋白(SHBs)。乙肝病毒大分子蛋白表面又分為前S1區(qū)、前S2區(qū)和S區(qū)。有研究表明，PreS1只存在于表面抗原的大分子蛋白中，是乙肝早期診斷和病毒復(fù)制的指標(biāo)，在病毒顆粒的裝配和感染中起重要作用；目前最受關(guān)注的兩個重要表位：第21-47號氨基酸所在的表位(簡稱P21表位)和第94-117號氨基酸所在的表位(簡稱P94表位)，存在病毒與肝細胞膜的結(jié)合位點。

根據(jù)HBV全基因組序列差別>8％將HBV分為A-I九個基因型，根據(jù)S基因的差別>4％可將HBV基因型分為20個亞型。目前，國際上已經(jīng)存在不同基因型的參照序列以及以此為依據(jù)建立了多種基因型檢測方法，但這些參照株多為單一患者來源，本身就存在多種堿基替代情況，且不同地區(qū)的相同基因型或亞型間還有較大差異，對于不同地區(qū)需建立相應(yīng)適合的參照序列，這對于具體研究時所用的多肽序列選擇造成了很大的困難。

目前，多肽主要通過化學(xué)合成和生物合成制備得到，其中多肽的化學(xué)合成有液相合成和固相合成之分，每種多肽合成方法應(yīng)用方式不同且各有利弊。對于小片段多肽的合成(30個氨基酸以內(nèi)，少數(shù)為50個氨基酸以內(nèi))多采用固相逐步合成方法，該方法精準和有針對性，但隨著氨基酸數(shù)量的增加，合成效率逐步下降，非目的肽含量逐步增長，目的肽的純度相應(yīng)降低，后續(xù)的純化和重復(fù)性愈加困難。對于大片段多肽(含100個以上氨基酸)目前大多應(yīng)用液相分段合成法，原理是根據(jù)多肽片段在溶液中的專一性或化學(xué)選擇性，自發(fā)連接成長肽，但步驟繁瑣，不易合成，且精準度和針對性有待完善。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決同一基因型的抗原肽段復(fù)雜多變或者抗原突變株增生，以及大片段多肽合成較困難的現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種檢測特異性抗體的新方法。傳統(tǒng)方法中，對于不同地區(qū)的不同患者，需選擇對應(yīng)的參照序列，并合成相應(yīng)的多肽作為檢測的包被抗原。本發(fā)明可避免對于包被抗原肽段選擇的糾結(jié)性，減少大片段抗原肽段的合成，并提高檢測結(jié)果的靈敏度。

本發(fā)明的第一個目的是提供了一種檢測特異性抗體的方法，是使用多表位肽段組合的方式代替全長肽段作為檢測抗原檢測樣本中的特異性抗體。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述方法，是采用兩個以上表位的肽段，分別偶聯(lián)大蛋白，然后以偶聯(lián)有大蛋白的兩個以上的肽段作為檢測抗原。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述檢測，可以是任意一種常規(guī)抗體檢測手段，比如ELISA。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述特異性抗體是指乙肝病毒PreS1抗體、乙肝病毒PreS2抗體、甲肝病毒VP1抗體、甲肝病毒VP3抗體、丙肝病毒E2抗體等。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述表位，包括乙肝病毒PreS1抗體的P21表位、P94表位，PreS2抗體的120-145號氨基酸表位；甲肝VP1抗體的11-25號氨基酸表位、VP3抗體的102-121號氨基酸表位；丙肝病毒E2抗體的384-410號氨基酸表位、412-423號氨基酸表位、523-535號氨基酸表位等。

在本發(fā)明的一種實施方式中，所述肽段包括氨基酸序列為SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2的肽段。