[發(fā)明專利]一種甘薯塊根中甘薯褪綠矮化病毒和甘薯雙生病毒的多重PCR檢測(cè)及預(yù)警方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611237638.2
• 申請(qǐng)日: 2016-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN106755579B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爽;張振臣;田雨婷;喬奇;秦艷紅;王永江;張德勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發(fā)明公開了一種甘薯塊根中甘薯褪綠矮化病毒和甘薯雙生病毒的多重PCR檢測(cè)及預(yù)警方法。本發(fā)明了針對(duì)SPCSV和Sweepoviruses兩類病毒，設(shè)計(jì)特異性引物對(duì)CP?F和CP?R、引物對(duì)VF和VR，檢測(cè)引物具有很好的特異性，僅能從目標(biāo)病毒樣品中擴(kuò)增到特異大小的條帶。本發(fā)明利用多重PCR引物建立的甘薯SPCSV和Sweepoviruses病毒的檢測(cè)方法，能夠通過一次PCR反應(yīng)，同時(shí)檢測(cè)甘薯塊根中是否存在SPCSV和Sweepoviruses兩類甘薯病毒，建立了一種根據(jù)甘薯種薯是否帶毒，進(jìn)一步判斷種薯質(zhì)量的預(yù)警方法。本發(fā)明明確了甘薯塊根帶毒與甘薯苗期、大田期病毒癥狀及產(chǎn)量損失的關(guān)系，為通過檢測(cè)種薯是否攜帶病毒，進(jìn)而判斷種薯質(zhì)量是否合格提供了依據(jù)，對(duì)于脫毒甘薯種薯質(zhì)量和病害流行預(yù)警具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甘薯塊根中甘薯褪綠矮化病毒和甘薯雙生病毒的多重PCR檢測(cè)引物、方法及脫毒種薯質(zhì)量預(yù)警方法，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

甘薯是我國(guó)重要的糧食作物，也是重要的食品加工和工業(yè)原料。我國(guó)是世界上最大的甘薯生產(chǎn)國(guó)，甘薯種植面積占全世界種植面積的45％左右。病毒病是危害甘薯的一類重要病害，可造成嚴(yán)重的產(chǎn)量損失和種性退化。目前全世界已報(bào)道侵染甘薯的病毒有30余種，其中，甘薯褪綠矮化病毒(SPCSV)和甘薯雙生病毒(Sweepoviruses)是侵染甘薯的兩類重要病毒，SPCSV侵染甘薯一般可引起15-88％的產(chǎn)量損失，特別是SPCSV可與多種病毒復(fù)合侵染甘薯形成協(xié)生病害，引起更嚴(yán)重的產(chǎn)量損失，甚至絕收。侵染甘薯的菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)病毒與侵染其它植物的Begomovirus明顯不同，把這類病毒稱之為“Sweepoviruses”。Sweepoviruses是甘薯上的一類重要病毒，據(jù)研究，我國(guó)甘薯上至少存在10種Sweepoviruses，包括SPLCV、SPLCCNV、SPLCGoV、SPLCCaV、SPLCShV、SPLCCSV、SPLCHnV、SPLCHnSV、SPLCGxV和SPLCJsV。甘薯雙生病毒侵染甘薯一般可引起11-86％的產(chǎn)量損失，對(duì)甘薯生產(chǎn)危害很大。目前對(duì)甘薯病毒病尚無(wú)特別有效的化學(xué)防治方法，種植脫毒甘薯是防治病毒病最經(jīng)濟(jì)有效的方法。在培育和推廣種植脫毒甘薯的過程中，需要對(duì)脫毒種薯種苗進(jìn)行嚴(yán)格的病毒檢測(cè)，只有經(jīng)過檢測(cè)不含病毒，特別是不含SPCSV和Sweepoviruses的種薯種苗才能在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用，否則會(huì)引起產(chǎn)量損失和病毒病的流行和擴(kuò)散蔓延。目前對(duì)SPCSV和Sweepoviruses的檢測(cè)主要采用血清學(xué)方法或單一PCR方法。單一PCR方法需多次進(jìn)行PCR，成本高，效率低，特別是甘薯塊根中由于淀粉和多糖含量高，嚴(yán)重影響核酸提取質(zhì)量和病毒的檢測(cè)效率。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種甘薯塊根中甘薯褪綠矮化病毒和甘薯雙生病毒的多重PCR檢測(cè)及預(yù)警方法，該方法一次PCR反應(yīng)，可檢測(cè)甘薯塊根中是否存在SPCSV和Sweepoviruses兩類甘薯病毒，有效地提高了檢測(cè)效率，降低了檢測(cè)成本。同時(shí)，本發(fā)明可通過檢測(cè)種薯是否攜帶病毒，進(jìn)而判斷種薯質(zhì)量是否合格，為脫毒甘薯種薯質(zhì)量預(yù)警提供了一種方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種檢測(cè)甘薯塊根中甘薯褪綠矮化病毒和甘薯雙生病毒的多重PCR引物，所述的多重PCR引物包括引物對(duì)CP-F和CP-R、引物對(duì)VF和VR；其中，各引物對(duì)的序列如下：

CP-F：5’—ACGAGTATGGCTGATAGCACTAA—3’

CP-R：5’—GTGAAGACCTGTTCCAGTCAACT—3’

VF：5’—GTAAGCGTGTTTGTGTGAAGT—3’

VR：5’—TCCATTCGGATCTTAGCAGTAGT—3’。

一種甘薯塊根中甘薯褪綠矮化病毒和甘薯雙生病毒的多重PCR檢測(cè)方法，包括以下步驟：