[發明專利]一種異丁香酚單加氧酶操縱子基因及其重組載體和重組假單胞菌

有效

• 申請號: 201611220201.8
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106754773B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 謝磊;李慧芝;祝海霞;張鵬;李斌
• 申請（專利權）人: 波頓（上海）生物技術有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/78;C12N1/21;C12P7/24;C12R1/38;C12R1/385;C12R1/40
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種異丁香酚單加氧酶操縱子基因，其特征在于，為SEQ ID NO:2-5任意一個所示的核苷酸序列。

2.權利要求1所述操縱子基因在制備重組載體和/或重組惡臭假單胞菌中的應用。

3.根據權利要求2所述應用，其特征在于，所述載體為質粒或病毒。

4.根據權利要求3所述應用，其特征在于，所述質粒為pBBR1 MCS質粒。

5.根據權利要求4所述應用，其特征在于，所述pBBR1 MCS質粒為pBBR1MCS-5-start質粒。

6.根據權利要求2所述應用，其特征在于，所述惡臭假單胞菌為惡臭假單胞菌KT2440或惡臭假單胞菌MTCC5279。

7.一種重組質粒，其特征在于，包括基礎質粒和位于基礎質粒上的權利要求1所述操縱子基因。

8.根據權利要求7所述重組質粒，其特征在于，所述基礎質粒為pBBR1 MCS質粒。

9.根據權利要求8所述重組質粒，其特征在于，所述pBBR1 MCS質粒為pBBR1MCS-5-start質粒。

10.權利要求7-9任意一項所述重組質粒在制備重組惡臭假單胞菌中的應用。

11.根據權利要求10所述應用，其特征在于，所述惡臭假單胞菌為惡臭假單胞菌KT2440或惡臭假單胞菌MTCC5279。

12.一種重組惡臭假單胞菌，其特征在于，轉化有權利要求7-9任意一項所述重組質粒。

13.根據權利要求12所述重組惡臭假單胞菌，其特征在于，所述重組惡臭假單胞菌為重組惡臭假單胞菌KT2440或重組惡臭假單胞菌MTCC5279。

14.權利要求12-13任意一項所述重組惡臭假單胞菌在制備催化異丁香酚轉化為香蘭素的催化劑和/或生產香蘭素中的應用。

15.根據權利要求14所述應用，其特征在于，所述催化劑為重組惡臭假單胞菌的菌體細胞、菌體細胞提取物、發酵液、發酵液提取物或重組惡臭假單胞菌產生的異丁香酚單加氧酶。

16.一種生產催化異丁香酚轉化為香蘭素的催化劑，其特征在于，該催化劑為權利要求12-13任意一項所述重組惡臭假單胞菌的菌體細胞、菌體細胞提取物、發酵液或發酵液提取物。

17.一種制備異丁香酚單加氧酶的方法，其特征在于，將權利要求12-13任意一項所述重組惡臭假單胞菌接種至種子培養基中進行活化培養，然后接種到發酵培養基中進行發酵培養，至培養基的濁度OD₆₀₀值不再變化時，將培養基離心，收集菌體細胞，重懸并破碎菌體細胞，離心收集上清獲得異丁香酚單加氧酶。

18.根據權利要求17所述方法，其特征在于，所述種子培養基和發酵培養基均為LB培養基。

19.根據權利要求17或18所述方法，其特征在于，所述發酵培養基還包括誘導劑和/或伴侶因子，所述誘導劑為異丁香酚、茴香腦、丁香酚、阿魏酸、愈創木酚、4-乙基愈創木酚、松柏醛、松伯醇、甲苯、原兒茶醛中的一種或兩種以上，所述伴侶因子為Fe²⁺、Fe³⁺、Co²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Mo²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、NADH、FAD、維生素C中的一種或兩種以上。