[發明專利]一種誘導葡萄痂囊腔菌產孢的方法

有效

• 申請號: 201611220119.5
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106834135B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 李智;王西平
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 61216 西安恒泰知識產權代理事務所
• 代理人: 王芳<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明中公開了一種誘導葡萄痂囊腔菌產孢的方法，該方法取生長在裝有PDA培養基的培養皿生長15天的葡萄黑痘病病原真菌菌落的外圈菌絲體接種于新的無菌裝有PDA培養基的培養瓶中；25℃下黑暗培養25天后，將培養瓶在21℃下，黑暗放置24小時；用無菌手術刀刮取菌落表面組織，擠壓成粉末狀，然后放入無菌水中，震蕩30秒，取上清液用血球計數板進行孢子計數。該方法操作簡單，能夠穩定獲得較多的分生孢子，以便用于篩選抗黑痘病的葡萄種質，為抗病育種和葡萄病理研究提供保障。

技術領域

本發明屬于果樹病理學技術領域，具體涉及一種用于誘導葡萄痂囊腔菌產孢的方法。

背景技術

葡萄病害種類多，危害嚴重，其中葡萄黑痘病分布廣泛，在我國南北多雨地區大量發生，發病嚴重時最高可造成果實損失50％，嚴重影響了葡萄的產量和品質，已經成為制約葡萄產業健康發展的主要因素之一。葡萄黑痘病是由葡萄痂囊腔菌(Elsinoe ampelina)引起的一種真菌性病害，危害葡萄的新梢、蔓、葉柄、葉脈、果柄及果實等部位。

葡萄痂囊腔菌的無性階段為半知菌亞門痂圓孢菌屬，有性階段為子囊菌亞門痂囊腔菌屬，在人工培養基上生長緩慢。據報道，葡萄痂囊腔菌在谷類瓊脂培養基上生長較好，但培養8周才能達到8cm²左右。該病原菌極難產孢，目前主要通過紫外輻射處理和加水培養獲得孢子，但產孢不穩定，操作不便，尤其是產孢量小。

發明內容

針對葡萄痂囊腔菌是葡萄黑痘病的病原菌，該菌生長緩慢，且產孢困難的技術難題，本發明的目的在于，提供一種誘導葡萄痂囊腔菌產孢的方法。

為了實現上述任務，本發明采用如下的技術解決方案：

一種誘導葡萄痂囊腔菌產孢的方法，其特征在于，按以下步驟進行：

(1)取生長在裝有PDA培養基的培養皿生長15天的葡萄黑痘病病原真菌菌落的外圈菌絲體接種于新的無菌裝有PDA培養基的培養瓶中；

(2)25℃下黑暗培養25天后，將培養瓶在21℃下，黑暗放置24小時；

(3)用無菌手術刀刮取菌落表面組織，擠壓成粉末狀，然后放入無菌水中，震蕩30秒，取上清液用血球計數板進行葡萄痂囊腔菌孢子計數，得到葡萄痂囊腔菌孢子。

根據本發明，所述的PDA培養基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基配方為：1000毫升純水、200克馬鈴薯、20克葡萄糖、15克瓊脂。

進一步的，所述的培養瓶為玻璃材質，塑料瓶蓋上有0.22微米的微孔，能過濾微生物的透氣膜，其規格為250毫升，口徑、胸徑和瓶高的尺寸分別為5.6厘米、6.9厘米和9.1厘米。

根據本發明，所述的葡萄痂囊腔菌的DNA序列是：