[發明專利]一種氨基酸序列、含OVA表位的融合蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201611210828.5
• 申請日: 2016-12-24
• 公開（公告）號: CN107056932B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 楊平常;徐靈芝;謝瑞娣
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C07K14/77
• 分類號: C07K14/77;C07K19/00;C12N15/62;A61K39/35;A61K47/68;A61P37/08;G01N33/68
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

本發明提供了一種編碼OVA表位的氨基酸序列、含OVA表位的融合蛋白及其制備方法和應用，所融合抗體的氨基酸序列包括抗DEC抗體單鏈可變片段的氨基酸序列和OVA表位。本發明通過雞蛋過敏患者血清和小鼠OVA IgG1抗體篩選模式化抗原OVA優勢T細胞表位，再利用scFv DEC能與樹突狀細胞受體DEC205特異識別并結合的特性，制備scFv DEC:OVA表位融合蛋白，將T表位肽靶向DC，將為食物過敏及其他過敏性疾病開辟新的治療藥物研發途徑。本發明提供含OVA表位的融合蛋白具備良好的結合BMDCs的能力，可抑制OVA誘導的小鼠過敏性炎癥的發生，有望應用于防治雞蛋過敏性炎癥、甚至有望應用于防治所有的過敏性疾病。

技術領域

本發明涉及生物醫藥和診療領域，具體涉及一種氨基酸序列、含OVA表位的融合蛋白及其制備方法和應用。

背景技術

食物過敏和相關疾病在全球范圍內迅速增加，大約4％-8％的兒童和1％-2％的成年人對食物抗原具有IgE介導的高反應性。食物過敏(food allergy)癥狀輕則表現為輕度不適，重則表現為威脅生命的過敏性休克，己經成為對社會、經濟有巨大影響的疾病。盡管食物過敏的死亡率較為罕見，初步估算每年死亡率約為1.8/1000，000。對食物過敏意外的恐懼及飲食回避導致的社會影響嚴重影響到過敏性炎癥兒童及其照顧者的生活質量。在前瞻性過敏原特異性食物過敏治療臨床研究中，口服耐受治療已受到諸多關注，然而有研究表明，這種免疫治療可引起嚴重不良反應(如胃腸道炎癥和過敏)。為確保口服耐受治療的安全型和有效性，急需發展低風險靶向治療。

樹突狀細胞(Dendritic Cells,DCs)是專職抗原提呈細胞，DCs在過敏原特異性免疫治療中發揮重要作用，可能成為誘導食物過敏原免疫耐受的有力靶標。上皮細胞受體(Dendritic and Epithelium Cells，DEC205)屬于I類C型凝集素，幾乎專一表達于DC表面，因其分子量約205kDa，(205kD)故被稱為DEC205。研究證實免疫系統處于靜息狀態時，抗原經anti-DEC靶向DC，可誘導T細胞免疫耐受。若同時附加額外刺激，如TLR配體CpG，Poly(I:C)則可有效活化DCs，誘導長時間持續性抗腫瘤應答。

單鏈抗體(single-chain antibody fragment，scFv)由抗體重鏈可變區和輕鏈可變區通過15～20個氨基酸短肽(linker)連接而成，它不僅保留了特異性識別抗原的特性，而且具有自身體積小、穿透力強、免疫原性低等優點。有研究將scFv DEC與髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein,MOG)基因融合形成scFv DEC:MOG，靜脈注射scFv DEC:MOG可誘導脾臟TDC的形成。scFv DEC潛在成為靶向DEC205⁺DCs誘導免疫耐受的重要工具。

特異性免疫療法是治療I型超敏反應的唯一可靠方法，借助誘導過敏原特異性T細胞耐受可能達到治療目的。臨床治療主要是過敏原皮下逐漸加大劑量的脫敏治療，但伴隨的全身性副作用較為常見。大量報道表明T輔助細胞在過敏反應免疫應答的誘導和調節過程中發揮重要作用，然而精確表位鑒定及過敏原特異性CD4+T細胞功能特性在單一表位水平的研究有限，妨礙了新型高效疫苗的研發。T細胞表位不能夠與錨定在肥大細胞表面的IgE發生交聯，故全身性副作用較少；截止目前，肽免疫治療已成功應用于昆蟲毒液和貓過敏。雞卵清蛋白(OVA)，是主要的雞卵過敏原，已作為模式化抗原廣泛應用于人類雞蛋過敏性疾病的研究。

目前，還未有一種既能特異識別并結合樹突狀細胞受體DEC205，又能高效將T表位肽靶向DC，從而有效抑制食物過敏及其他過敏性疾病的抗體藥物。

發明內容

解決的技術問題：本發明提供了一種含OVA表位的融合蛋白及其制備方法和應用。

本發明的技術方案如下：

第一方面，本發明提供了一種氨基酸序列，所述氨基酸序列包括至少一個OVA表位，編碼所述OVA表位的氨基酸序列為選自如下序列1)或2)中的任一種：