[發(fā)明專利]一種類鮑魚蛋白質(zhì)保健飲料的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611209997.7
• 申請(qǐng)日: 2016-12-24
• 公開（公告）號(hào): CN106721726A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫治政;劉建文;姜軍強(qiáng);王菁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東明鑫集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): A23L2/02
• 分類號(hào): A23L2/02;A23L2/04;A23L2/52;A23L2/66;A23L2/72;A23L33/10;A23L33/105;A23L33/17;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種以鮑魚蛋白質(zhì)類似物和植物中藥為原料制備的類鮑魚蛋白質(zhì)保健飲料的制備方法。

背景技術(shù)

鮑自古被譽(yù)為海味珍品之冠，自古以來被視為佐膳佳肴及珍貴滋補(bǔ)品。現(xiàn)代研究結(jié)果表明，鮑魚的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極為豐富，含有二十多種氨基酸，每百克鮮鮑魚肉含豐富蛋白質(zhì)23.4 克，含量高達(dá)20%以上，鮑魚不僅有滋補(bǔ)、保健作用，而且對(duì)于養(yǎng)陰、平肝、固腎、調(diào)節(jié)血壓，潤(rùn)燥利腸等均有明顯功效，深受消費(fèi)者的喜愛。

鮑魚的食用方法多種多樣，有鮮食、干制以及冷凍保存后食用等多種方法。而鮑魚飲料的制作方法，已有公開文獻(xiàn)報(bào)道，例如，公開的CN104997097A、CN105011309A中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開說明中均公開了鮑魚飲料的制作方法，其均是采用鮑魚進(jìn)行蛋白酶解后與其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)配伍。這種方法制備的飲料營(yíng)養(yǎng)豐富，但價(jià)格一定昂貴，不符合普通的工薪階層的需要。另外，由于海產(chǎn)品固有的腥味，使這種飲料的口感也大打折扣。因此，研發(fā)一種既具有鮑魚營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，又能不給食用者造成經(jīng)濟(jì)壓力、口感良好的的替代產(chǎn)品就顯得十分必要。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)中采用鮑魚酶解制作飲料存在價(jià)格昂貴、口感欠缺的不足，本發(fā)明提供一種工藝合理、易于操作、原料生產(chǎn)成本低、口感好的類鮑魚蛋白質(zhì)保健飲料的制備方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：一種類鮑魚蛋白質(zhì)保健飲料的制備方法，其特征在于：其經(jīng)過下列工藝步驟：

（1）、鮑魚細(xì)胞RNA的提取

（1.1）、勻漿處理

稱取100～200mg鮑魚組織在液氮中磨碎，加入1～2ml TRIzol，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理；

（1.2）、靜置

將步驟（1.1）中得到的勻漿后的混合物在室溫條件下靜置3～5min，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離；

（1.3）、離心去雜質(zhì)

將步驟（1.2）中得到的靜置后的混合物于2～8℃條件下，10000g離心8～10min，收取上清液；

（1.4）、抽提

將步驟（1.3）中得到的上清液中加入其體積10%～20%的氯仿，劇烈振蕩15～20s，室溫靜置2～3min；

（1.5）、離心

將步驟（1.4）中得到的室溫靜置后的混合物于2～8℃條件下，10000g離心10～15min；樣品分為三層：有機(jī)相、水相和中間層；

（1.6）、沉淀

將步驟（1.5）中的水相層轉(zhuǎn)移到新試管中，按體積比1:1～2的比例加入異丙醇，室溫靜置8～10min，于2～8℃條件下，10000g離心8～10min，管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀，移去上清液，即得RNA沉淀；

（1.7）、洗滌

向步驟（1.6）中得到的RNA沉淀中加入1～1.5ml、濃度為75%的乙醇溶液進(jìn)行洗滌，再于2～8℃條件下，6000～7500g離心3～5min，棄上清液，得洗滌后的RNA沉淀；

（1.8）、干燥

將步驟（1.7）中得到的洗滌后的RNA沉淀室溫放置干燥5～10min，然后加入25～200μl無RNase的水，用槍頭吸打混勻，于55～60℃條件下靜置8～10min，使RNA溶解，-70℃保存，備用；

（2）、反轉(zhuǎn)錄

將步驟（1.8）中得到的保存的RNA采用RT-PCR的方法，利用反轉(zhuǎn)錄酶SuperScriptTM^II和隨機(jī)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得鮑魚細(xì)胞的cDNA；

（3）、構(gòu)建表達(dá)載體

將步驟（2）中得到的鮑魚細(xì)胞的cDNA以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，利用大量隨機(jī)引物：引物L(fēng)-隨機(jī)和R-隨機(jī) PCR擴(kuò)增25個(gè)循環(huán)后回收，酶切后，回收產(chǎn)物與pET32(a)載體連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，得到含有表達(dá)載體pET32(a)-隨機(jī)的大腸桿菌，挑取菌落，接種入LB液體培養(yǎng)基，待菌液濃度為OD值接近1.0時(shí)，向其中加入菌液體積10%～15%的甘油，-70℃保存，得到轉(zhuǎn)化入表達(dá)載體的菌株；

（4）、蛋白表達(dá)