[發明專利]一種丙型肝炎病毒抗體檢測試紙的制備方法

在審

• 申請號: 201611203294.3
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN107014994A
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 丁錦勤;黃政;馬軍
• 申請（專利權）人: 蘇州萬木春生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司32234
• 代理人: 馬云玉

技術領域

本發明屬于生物應用技術領域，特別是涉及一種丙型肝炎病毒抗體檢測試紙的制備方法。

背景技術

丙型病毒性肝炎，即HCV，簡稱為丙型肝炎、丙肝，是一種由丙型肝炎病毒感染引起的病毒性肝炎。丙型肝炎是一種全球性流行的傳染病，全球丙型肝炎流行率平均為3.0%，每年新發HCV感染300萬~400萬例，估計已有1.7億慢性HCV感染者。HCV最主要的傳播方式包括經輸血和血制品傳播、經破損的皮膚和黏膜暴露、與感染者性交及高危性行為等。過去獻血員中HCV感染率較高，是造成HCV流行的主要原因。隨著全球多數國家積極開展對獻血員的篩查，目前該人群中 HCV感染率迅速下降，與一般人群HCV感染率相近，而吸毒和高危性行為人群中HCV感染率顯著高于一般人群，是目前 HCV流行的重要傳染源。

HCV感染自然轉陰率低，慢性化發生率明顯高于乙肝，治療效果差，且與肝硬化肝癌的發生及發展密切相關。目前國內尚無HCV抗病毒特效藥物和相關疫苗。因此，控制HCV感染的形勢十分嚴峻。目前主要靠早發現、早診斷和早治療來防控HCV傳染源、阻斷傳播途徑。HCV抗體檢查、乙肝表面抗原、人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體及梅毒（TP）抗體檢查是我國法定的四個血源性篩查項目。

臨床上有較多的丙型肝炎病毒抗體檢測方法，主要包括酶聯免疫法、化學發光免疫分析法。酶聯免疫法的試劑盒靈敏度和特異性達不到理想要求，化學發光法的檢測成本較高，這兩種方法存在的缺點使其難以進行推廣應用，無法作為篩查丙型肝炎病毒抗體的重要手段。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種丙型肝炎病毒抗體檢測試紙的制備方法，該制備方法得到的檢測試紙以雙抗原夾心法為原理，診斷快速且結果準確，相比間接法能夠提高產品的特異性和靈敏度，具有快捷、觀察直觀、省時等特點，能作為篩查丙型肝炎病毒抗體的重要手段。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：提供一種丙型肝炎病毒抗體檢測試紙的制備方法，包括步驟為：

（1）制備重懸液：所述重懸液中包括三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白，將三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容，調節pH值至8-9，得到重懸液；制備包被基液：用海藻糖溶于pH值為7-8的磷酸鹽緩沖溶液并定容，得到包被基液；

（2）將膠體金和碳酸鉀混合后調節pH值，再加入丙型肝炎病毒標記單抗和牛血清白蛋白溶液，離心得到沉淀，所述沉淀用步驟（1）制備的重懸液重懸，再加入丙型肝炎病毒標記抗原，得到丙型肝炎病毒抗體檢測免疫金；

（3）用所述包被基液、無水乙醇稀釋丙型肝炎病毒包被抗原得到檢測線包被液，用所述包被基液、無水乙醇稀釋羊抗鼠IgG多抗得到對照線包被液；

（4）用所述丙型肝炎病毒抗體檢測免疫金對金墊噴金得到免疫金墊，用所述檢測線包被液、所述對照線包被液分別在硝酸纖維素膜上劃線，得到反應膜。

（5）將所述反應膜在膜封閉液中浸泡后取出貼于聚氯乙烯底板上干燥，得到貼膜的聚氯乙烯底板；

（6）將樣品墊、免疫金墊、貼膜的聚氯乙烯底板和吸水紙組裝得到丙型肝炎病毒抗體檢測試紙。

在本發明一個較佳實施例中，步驟（1）中所述三羥甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白和定容后總體積的比例為0.24g：10g：5g：1g：100mL。

在本發明一個較佳實施例中，步驟（1）中所述重懸液的pH值用1M鹽酸調節至8.4；所述磷酸鹽緩沖溶液為0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖溶液。

在本發明一個較佳實施例中，步驟（2）的具體過程為：將膠體金置于磁力攪拌器上攪拌，往攪拌的膠體金中加入碳酸鉀，調節pH并攪拌10min，加入丙型肝炎病毒標記單抗并攪拌15min，再加入牛血清白蛋白溶液，攪拌15min，在4℃、轉速為10000r/min的條件下離心20 min得到沉淀，所述沉淀用所述重懸液重懸至離心前體積的1/10，再加入丙型肝炎病毒標記抗原，得到丙型肝炎病毒抗體檢測免疫金。

在本發明一個較佳實施例中，步驟（2）中所述碳酸鉀為0.2M碳酸鉀；所述0.2M碳酸鉀、所述丙型肝炎病毒標記單抗和所述丙型肝炎病毒標記抗原的比例為6uL/mL:5μg/mL:0.5μg/mL；所述牛血清白蛋白溶液為質量分數為10%的牛血清白蛋白溶液，所述牛血清白蛋白溶液的加入體積為所述膠體金體積的1/10。