[發(fā)明專利]流式細胞術快速檢測大腸桿菌O157:H7的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611201541.6 | 申請日： | 2016-12-23 |
| 公開（公告）號： | CN106841011A | 公開（公告）日： | 2017-06-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 李延斌;王靈;王蓉暉 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | G01N15/14 | 分類號： | G01N15/14;G01N21/64 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務所有限公司33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細胞 快速 檢測 大腸桿菌 o157 h7 方法 | ||
1.流式細胞術快速檢測大腸桿菌O157:H7的方法，其特征是包括以下內容：SYBR Green I對E.coli O157:H7進行染色；流式細胞術檢測E.coli O157:H7；通過B細胞捕獲不同濃度E.coli O157:H7所呈現(xiàn)的熒光強度，最終獲得待測樣品中細菌濃度。
2.根據(jù)權利要求1所述的流式細胞術快速檢測大腸桿菌O157:H7的方法，其特征是該方法依次包括以下步驟：
1)、在1mL待檢樣品中，加入2μL SybrGreen I原液，在室溫條件下避光孵育20±2min；
2)、對步驟1)所得樣品進行離心洗滌；
3)、取50μL步驟2)的所得物，加入至450μL 3.8×105cells/mL的B細胞無酚紅培養(yǎng)液中；
4)、將步驟3)所得物混勻后，以1400±100rpm的速度離心5±0.5min，棄掉上清，用400μL HBSS重懸沉淀后，用流式細胞儀進行檢測；
5)、將步驟4)檢測所得的SybrGreen熒光強度作為Y值，代入回歸方程Y＝26.74+74.36/(1+10^(6.011-X)*0.9185)中，所得的X為液態(tài)待測樣品中大腸桿菌的細菌濃度。
3.根據(jù)權利要求2所述的流式細胞術快速檢測大腸桿菌O157:H7的方法，其特征是：回歸方程的檢測限范圍為4.9×104CFU/mL至4.9×108CFU/mL。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的流式細胞術快速檢測大腸桿菌O157:H7的方法，其特征是：所述步驟2)中：以8000±100rpm的速度離心5±0.5min，棄掉上清后，用1mL的HBSS緩沖液重懸沉淀后進行重復洗滌，重復洗滌的次數(shù)為2～4次。
5.根據(jù)權利要求2或3所述的流式細胞術快速檢測大腸桿菌O157:H7的方法，其特征是：所述流式細胞儀為FACSCaliburTM(BD Biosciences,San Jose,CA,USA)。
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