[發明專利]一種來源考布他汀A?4衍生物的抗腫瘤機制研究

在審

• 申請號: 201611195045.4
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106727629A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 何書英;黃青林;吳綱
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A61K31/7034
• 分類號: A61K31/7034;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及考布他汀A-4衍生物CPU-TX-008對VEGF誘導的腫瘤血管內皮細胞遷移機制分析。

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及考布他汀A-4衍生物CPU-TX-008對VEGF誘導的腫瘤血管內皮細胞遷移機制分析。

背景技術

血管生成是一種高度調節的過程，在成熟的哺乳動物有機體中，生理性的血管發生只在卵巢、子宮和胎盤中，在其他組織中血管內皮細胞的更新率相當低。對于多數腫瘤而言，由于它們增殖失控，現有血管系統難以滿足正常的營養和氧分供應，代謝產物不斷堆積，腫瘤細胞因此通過上調一些促血管內皮細胞遷移的因子：血管內皮生長因子(VEGF)、Src激酶、局部粘著斑激酶(FAK)以及樁蛋白(paxillin)等激活來促進內皮細胞遷移至腫瘤組織中形成血管。人們研究CA-4的結構發現，CA-4的結構與秋水仙堿比較相似，具有1個順式乙烯橋連接的兩個苯環的基本結構，并且在環上有一些甲氧基取代。CA-4的水溶性差，難以靜脈給藥，CPU-XT-008是將CA-4結構上的羥基用水溶性更強的氨基葡萄糖基團取代，結構顯示，其不僅保持了CA-4較強的生物活性，水溶性也大大提高。本發明發現CPU-TX-008通過抑制HUVECs中的Src以及FAK蛋白的磷酸化來抑制細胞遷移，最終達到抑制腫瘤血管生長的目的。

CPU-TX-008是CA-4結構上的羥基用水溶性更強的氨基葡萄糖基團取代，藥理結構顯示，其不僅保持了CA-4較強的生物活性，水溶性也大大提高。但目前尚未有CPU-TX-008對人臍靜脈血管內皮細胞遷移機制的報道。

發明內容

本發明的目的是提供CPU-TX-008作為治療腫瘤藥物抑制人臍靜脈血管內皮細胞遷移的機制。

本發明公開了一種新的CA-4衍生物CPU-TX-008抑制VEGF誘導的人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)遷移信號通路。藥理實驗結果現實在10ng/ml的VRGF的作用下，0.1、1、10μmol/L CPU-XT-008可以顯著抑制HUVECs的遷移，同時以Src的抑制劑PP2作為對照組，結果顯示1μmol/L CPU-XT-008可以有效的抑制Src以及FAK蛋白的磷酸化。說明CPU-TX-008藥物可以通過Src-FAK信號通路來抑制血管形成，從而達到治療腫瘤的目的。

附圖說明

圖1為5組實驗的細胞劃痕實驗結果圖。

圖2為5組實驗的細胞劃痕實驗結果統計圖。

圖3為5組實驗Western blottingd的Src蛋白結果。

圖4為5組實驗Western blottingd的p-Src蛋白結果。

圖5為5組實驗Western blottingd的p-FAK蛋白結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步說明，但本發明不受實施例的限制。

實施例

對人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)給予藥物CPU-XT-008，MTT法檢測其的抗HUVECs增殖活性，并得出最佳作用濃度：

將HUVEC接種于96孔培養板，同步化后，將細胞分為空白組(無血清DMEM培養基)、模型組(10％新生牛血清DMEM培養基)、陽性對照組及給藥組。陽性對照組為10μmol/L CA-4，給藥組分別為0.01，0.1，1，10μmol/L CPU-XT-008，陽性對照組和給藥組均用10％新生牛血清DMEM培養基，繼續培養24h。每孔加入5mg/mL MTT溶液20μL，37℃孵育4h。吸出培養液后每孔加入DMSO 150μL溶解結晶，振蕩混勻后于562nm處測定各孔吸收度。根據之前實驗室已摸索成功的因子濃度進行誘導，分別為VEGF 10ng/ml、PP2 10ng/ml。

細胞劃痕實驗研究VEGF、CPU-XT-008、CA-4、PP2對HUVECs細胞遷移的影響：