[發明專利]結合測定

在審

• 申請號: 201611180971.4
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN108204958A
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 賈曉青;陳敏
• 申請（專利權）人: 伊繆泰普有限公司
• 主分類號: G01N21/45
• 分類號: G01N21/45;C07K14/705;G01N33/68
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 彭鯤鵬;鄭斌

1.一種用于測定包含淋巴細胞活化基因-3(LAG-3)蛋白或其片段、衍生物或類似物的制劑的MHC II類結合活性的方法，其中所述方法包括使用生物層干涉術(BLI)測定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物與MHC II類分子的結合。

2.根據權利要求1所述的方法，其包括測定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物與MHC II類表達細胞上存在的MHC II類分子的結合。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物被固定化到BLI探針的試劑層，并且所述MHC II類表達細胞是在溶液中的。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述MHC II類表達細胞可以至少1E6/mL，優選至少4E6/mL或8E6/mL的密度存在。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其中所述試劑層已用封閉試劑預處理以最小化所述MHC II類表達細胞與所述試劑層的非特異性結合。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述封閉試劑包括白蛋白，優選牛血清白蛋白(BSA)。

7.根據權利要求2至6中任一項所述的方法，其中所述MHC II類表達細胞是Raji細胞。

8.根據權利要求2至7中任一項所述的方法，其中所述MHC II類表達細胞是從冷凍儲備溶液獲得的解凍的、即用型細胞。

9.根據前述任一項權利要求所述的方法，其包括針對多種不同濃度的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物，測定所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物與所述MHC II類分子的結合速率，以及產生針對所述結合速率的劑量-應答曲線。

10.根據前述任一項權利要求所述的方法，其還包括在與用于測定所述制劑的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物的結合相同的條件下，通過使用BLI測定參比樣品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物與MHC II類分子的結合來測定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或類似物的所述參比樣品的MHC II類結合活性，并且將針對所述參比樣品測定的所述MHC II類結合活性與針對所述制劑測定的所述MHC II類結合活性進行比較。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述參比樣品的所述MHC II類結合活性被設定為100％。

12.根據權利要求10或11所述的方法，其中所述參比樣品包含LAG-3蛋白或其片段、衍生物或類似物，所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或類似物已進行處理以降低其MHC II類結合活性。

13.根據權利要求12所述的方法，其中所述參比樣品的所述LAG-3蛋白、片段、衍生物或類似物已去糖基化、在37℃下儲存至少12天、氧化、通過酸或堿處理變性，或暴露于光至少5天。

14.一種用于測定LAG-3蛋白或其片段、衍生物或類似物的MHC II類結合活性的BLI探針，所述BLI探針包括所述LAG-3蛋白或其片段、衍生物或類似物所固定化到的試劑層。

15.根據權利要求14所述的探針，其中所述試劑層已用封閉試劑預處理以最小化所述MHC II類表達細胞與所述試劑層的非特異性結合。

16.根據權利要求15所述的探針，其中所述封閉試劑包括白蛋白，優選BSA。