[發明專利]檢測孔雀石綠的適配體電化學生物傳感器及其制備方法

有效

• 申請號: 201611175306.6
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106706748B
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 陳旭;朱萬軍;吳立冬;付嘯辰;楊文勝
• 申請（專利權）人: 北京化工大學;中國水產科學研究院
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 北京華誼知識產權代理有限公司 11207
• 代理人: 王普玉

1.一種檢測孔雀石綠的適配體電化學生物傳感器，包括識別元件和換能器，其特征在于，識別元件是單鏈DNA適配體，序列為GGATCCCGACTGGCGAGAGCCAGGTAACGAATGGATCC，含有38個堿基，5’端修飾-SH-(CH₂)₆-，在3’端修飾電活性物質亞甲基藍MB作為信標分子；換能器為常用的電化學型換能器。

2.一種權利要求1所述傳感器的制備方法，具體步驟及參數如下：

1)金電極的拋光及活化處理：將金電極在拋光布上用氧化鋁粉末打磨，用乙醇和超純水分別超聲清洗，然后在硫酸溶液中電化學掃描活化，超純水沖洗后，用氮氣吹干待用；

2)適配體溶液的配制：將單鏈DNA適配體冷凍液，先渦旋1～3min，使其均勻分散，用超純水配制濃度為3.3～10μmolL^-1的適配體溶液；

3)修飾電極的制備：取5～10μL步驟2)中配制的適配體溶液，滴在步驟1)活化后的金電極表面，將電極置于4℃的冰箱中組裝12～16h，用蒸餾水洗去非特異性吸附的適配體，然后用于檢測。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述的修飾電極不使用時，在冰箱4℃下保存。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，以步驟3)中制備的修飾電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，Pt為對電極，磷酸緩沖液為檢測底液，采用差分脈沖伏安法DPV來檢測，掃描電位范圍為0.2～-0.5V，振幅為0.05V，以MB作為信標分子，記錄其DPV譜圖，得到MB的還原峰電流值，作為空白時的電流響應I₀；再將修飾電極依次浸入含有孔雀石綠標準品的檢測底液中，在濃度為1×10^-1～1×10⁴pg L^-1的各個數量級分別選取1-2個測試點，各濃度在室溫下孵育100～600s，接下來記錄工作電極的DPV曲線，得到在不同濃度孔雀石綠的MB的DPV譜圖以及相應的還原峰電流值I_p，并計算不同濃度的孔雀石綠相對于初始適配體傳感器峰電流的相對變化差值ΔI＝I_p-I₀；以含有孔雀石綠標準品的檢測底液濃度的對數值lgC為橫坐標，ΔI為縱坐標作圖，建立標準曲線。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的磷酸緩沖液的pH值為6.0～8.0，濃度為0.05～0.1molL^-1。