[發明專利]一種重組蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201611161610.5
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN108218970B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 游欣欣;石瓊;張新輝;阮志強;陳潔明;徐軍民
• 申請（專利權）人: 深圳華大生命科學研究院;深圳華大海洋科技有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;B01J20/24;B01J20/30;C02F1/28;G21F9/18;C02F101/20
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯桂麗

本發明涉及分子生物學領域，尤其涉及一種重組蛋白及其制備方法和應用，具體涉及翡翠貽貝足絲蛋白基因的體外重組表達技術及其功能鑒定，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明通過轉錄組技術和蛋白質譜技術相結合的方法制備得到一個翡翠貽貝足絲重組蛋白Pvfp6，所述翡翠貽貝足絲重組蛋白Pvfp6的氨基酸分子量為13.25kDa，等電點為6.48，該重組蛋白對重金屬離子Cd具有有效的富集作用，在治理重金屬或是放射性污染的水體具有潛在的應用價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，尤其涉及一種重組蛋白及其制備方法和應用，具體涉及翡翠貽貝足絲蛋白基因的體外重組表達技術及其功能鑒定。

背景技術

重金屬是對生態環境危害極大地一類污染物，因其進入環境后不能被生物降解，而往往參與食物鏈循環并最終在生物體內積累，破壞生物體正常生理代謝活動，危害人體健康。重金屬離子很難通過化學或是物理的方法去除或是被降解，尤其是在廢水中低濃度的重金屬離子，一些微生物、動物或植物對重金屬毒性具有獨特的抗性機制，使得利用它們清除水體中的重金屬離子成為一種可行的方法。越來越多的研究表明，不同的金屬結合蛋白(如MT和PC)，在生物忍耐和降解過量重金屬毒性機制中起著重要作用。

尤其，金屬硫蛋白(MTs)是一類低分子質量的富含半胱氨酸，能夠有效富集重金屬離子的蛋白質，它們通過半胱氨酸殘基上的巰基與重金屬結合形成無毒或低毒的絡合物，從而清除重金屬的毒害作用。CN 101781653 A公開了一種棗樹金屬硫蛋白基因及其在處理重金屬污染重的應用，是實現生物回收重金屬和質粒重金屬污染的有效手段。

還有其他的蛋白也具有富集重金屬的功能，CN 102924602 A公開了一種金離子吸附蛋白及富集并回收金離子的方法，該金離子吸附蛋白包含大腸桿菌外膜蛋白A片段和金離子結合蛋白GolB片段；或者包含金離子誘導蛋白片段和antigen43片段，該金離子吸附蛋白環境友好，不會對環境造成影響，能高效吸附多種重金屬中的金離子。

翡翠貽貝是營足絲附著生活的濾食性雙殼軟體動物，因其攝食和附著的生活方式，體內容易富集重金屬等污染物，能夠反映所在水域的環境變化狀況，被認為是最好的檢測重金屬污染指標的環境指示生物。

蔣臻等在“翡翠貽貝足絲粘附蛋白Pvfp-1粘附功能及其應用的研究”的博士論文中指出，應用基因工程方法獲得翡翠貽貝足蛋白Pvfp-1及其幾種缺失突變體。并分析對比這些缺失突變體的粘附功能，并進而探討其粘附機理的基礎上，設計合成了同樣源于Pvfp-1序列的多肽。但其翡翠貽貝足蛋白Pvfp-1并沒有富集重金屬的能力。

翡翠貽貝能夠分泌足絲，使其附著于礁石，營固著生活，而活體貽貝足絲具有較強的富集重金屬離子或放射性物質的能力，離體的足絲通過變性處理以后，依然具有較強的富集能力。因此開展翡翠貽貝足絲富集重金屬機制的研究，為治理重金屬污染水體尋找更科學的途徑，具有十分重要的理論與實踐意義。

發明內容

針對目前存在的問題，本發明提供一種重組蛋白及其制備方法和應用，利用體外重組表達技術獲得了翡翠貽貝足絲Pvfp6蛋白，該重組蛋白對重金屬離子Cd具有有效的富集作用，在治理重金屬或是放射性污染的水體具有潛在的應用價值。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種重組蛋白(Pvfp6蛋白)，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述SEQ ID NO.1(重組Pvfp6蛋白)所示的氨基酸序列如下：MISAVCIYFFLVGQIQAGVY IPYEKPGQCP VTRGITPCVC IPENFECRFD SNCPGAMKCC DFGCGCNKRC PPVPSPLQCYYNGQYYPIGA HFPSVDGCNT CYCNDDGTVM CTLKACGYGYK.

根據本發明，所述重組Pvfp6蛋白的分子量為13.25kDa，等電點為6.48。