[發明專利]一種紅細胞膜及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201611159359.9
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106754692B
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發明（設計）人: 汪德清;楊璐;于洋;馬春婭
• 申請（專利權）人: 汪德清
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;G01N33/68;G01N33/80
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 張丹

本發明提供了一種紅細胞膜及其制備方法和應用。本發明通過反復凍融法，并進一步結合勻漿破碎法和濾膜過濾，可以制備得到一種粒徑均勻分布并且具有良好的抗原性、特別是具有良好的稀有血型系統抗原性的紅細胞膜，解決了現有技術中紅細胞膜通常只具有ABO血型抗原而不具備稀有血型抗原性的問題，同時還解決了現有紅細胞膜粒徑分布不均勻的問題，提供了一種粒徑分布均勻并且具有全血型系統抗原性的紅細胞膜，可以用于意外抗體的篩查和鑒定，保證了輸血安全。

技術領域

本發明屬于醫學與生物學技術領域，涉及紅細胞膜的制備，具體地涉及一種紅細胞膜及其制備方法和應用。

背景技術

細胞膜的主要成分為蛋白質(約49％重量比)、脂類(約44％重量比，主要有磷脂、膽固醇、糖脂等)和糖類，具有重要的生物學功能，與物質代謝、能量轉換、細胞識別、細胞免疫、腫瘤發生等均高度相關，在分子生物學、細胞生物學、免疫學以及臨床醫學檢測等領域均有廣泛的研究以及應用價值。對于人體而言，紅細胞的數量大、取材容易，并且人體成熟的紅細胞沒有細胞核和細胞器，在因細胞內外滲透壓不平衡而導致細胞膨脹破裂、胞漿外漏(即醫學上所稱的溶血現象)時，遺留的紅細胞膜中無細胞器膜等雜質干擾，因此紅細胞膜是最適于作為研究細胞膜的材料。現已證明，紅細胞膜具有血型抗原活性，可與相應血型抗體反應，從而在紅細胞血型鑒定中發揮重要作用，這也是目前對于紅細胞膜研究的最重要應用；Siegel在1981年提出“紅細胞免疫系統”的概念之后，現已公認紅細胞膜蛋白亦具有免疫調節功能，在體內可發揮紅細胞免疫功能，結合循環免疫復合物，并可調節T淋巴細胞及B淋巴細胞的功能；CN 101327317 B發現同物種的紅細胞膜蛋白在具有相應血型抗體的人體內具有很好的殺瘤效應，并公開了一種由人紅細胞膜蛋白和緩沖液組成的治療腫瘤的注射液，等等。不難看出，前述相關領域的研究，均須建立在獲得具有抗原性的紅細胞膜的基礎上進行。

現有技術中紅細胞膜的制備主要是通過低滲溶解紅細胞，高速離心洗滌去除血紅蛋白后用等滲的鹽水或PBS重懸。CN101109755A公開一種紅細胞膜處理的方法，包括加預冷的0.01mol/L Tric-HCl與紅細胞混合，4℃放置2h，再離心20min至無肉眼可見的紅細胞為止。肖毅等(兩種提取紅細胞膜蛋白方法的比較，細胞與分子免疫學雜志，1997(2)：44-45)比較了兩種提取紅細胞膜蛋白的方法，其中一種是沉淀物加入預冷蒸餾水，離心后，因沉淀物中仍有少量紅細胞，加入0.01N冰醋酸，置4℃2h后離心，沉淀物加NS混勻后，再加0.1NNaOH，室溫30min，離心棄上清后加NS，用0.1N HCl(約0.1ml)調pH至7.4。現有提取紅細胞膜的方法通常采用有機溶劑，容易破壞細胞膜表面結構，極易喪失抗原性，特別是喪失稀有血型系統(ABO血型系統以外的其他血型系統)的抗原性，這將導致無法進行不規則抗體(意外抗體)的篩查，極大地增加了輸血風險；同時現有方法提取的紅細胞膜通常存在粒徑分布不均勻的問題。

為克服現有技術的缺陷，本發明提供一種粒徑分布均勻并且具有良好抗原性(特別是稀有血型系統抗原性)的紅細胞膜，以及其制備方法和應用。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種紅細胞膜，該紅細胞膜表面具有稀有血型抗原性，解決了現有紅細胞膜通常僅具有ABO血型抗原性而不具備稀有血型抗原性的問題。

本發明的另一個目的在于提供一種粒徑分布均勻的紅細胞膜。

本發明的同時提供所述紅細胞膜的制備方法。

本發明的再一個目的在于提供上述紅細胞膜在血型抗體檢測和鑒定技術領域的應用，其可以用于意外抗體的篩查和鑒定。

本發明的一方面提供了一種紅細胞膜，其具有良好的稀有血型抗原性，且粒徑分布均勻。

本發明所述的一種紅細胞膜，由如下方法制備而成：(1)取壓積紅細胞，加入生理鹽水于－20℃-－200℃冰凍，再于20℃-40℃融化；(2)離心，去上清，洗滌，得到的白色的沉淀物。