[發明專利]一種檢測喹諾酮類藥物沙拉沙星的酶聯免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201611158721.0
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN108226506A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 杜道林;薛永來;洪霞
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種檢測沙拉沙星的酶聯免疫試劑盒及檢測方法，所述的試劑盒由帶有微孔的包被板，沙拉沙星標準品，抗沙拉沙星的包被抗體，沙拉沙星酶標抗原，濃縮洗滌液，顯色液 A，顯色液 B 和終止液組成；取包被抗沙拉沙星抗原的微孔包被板，加入沙拉沙星標準品或處理好的樣品到各自的微孔中，同時加入沙拉沙星抗體工作液，再加入沙拉沙星酶，震蕩反應，洗滌液洗滌，經底物顯色，樣本吸光值與其含有的沙拉沙星量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中沙拉沙星的含量。

技術領域

一種快速高效檢測食品中抗生素沙拉沙星的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，屬于酶聯免疫分析 (ELISA) 技術領域，主要用于食品中沙拉沙星殘留的檢測。

背景技術

沙拉沙星是氟喹諾酮類抗生素，具有下列特性：由于獨特的化學結構，使其成為獸醫臨床藥物中十分重要的抗生素。沙拉沙星對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和支原體類病原菌均具有廣譜抗菌活性，在一定的濃度下對細菌支原體也具有殺菌作用，還能殺死對抗生素具有抗藥力的細菌，例如抗p一乳酸菌素、氨基糖昔等。沙拉沙星因其具有獨特的作用，自80年代開始就被廣泛的應用于動物和魚蝦類的疾病的預防和治療。但最近的研究發現，凡使用過沙拉沙星的動物，在一定時期內其產品都有殘留，因其具有神經毒性和腎臟毒性，所以在動物食品中殘留會對人類健康造成威脅和影響，歐美國家及我國均要求對其限量使用。2002年12月我國農業部公告第235號文規定在所有食品動物的肌肉、脂肪中最高殘留限量為100 μg /kg，在所有食品動物的肝、腎中最高殘留限量為200 μg/kg。因此，沙拉沙星己經列為獸藥殘留監控的重點。檢測沙拉沙星殘留量的化學方法主要有薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣一質聯機(GC/MS)、液一質聯機(HPLC/MS)、毛細管電泳(CE)等，由于復雜的儀器設各和繁瑣的過程，不適合現場監控和大量樣本篩查。

免疫分析技術以其抗原抗體反應的高度專一性，以及測定方法簡單、快速、靈敏度高、費用低和適于現場大批量樣品篩選等優點，在農獸藥殘留分析中展示了廣泛的應用前景。隨著農藥殘留免疫學檢測技術不斷被完善和商品化，免疫學檢測技術會成為食品農獸藥殘留和食品安全質量控制的有效快速檢測手段。基于目前獸藥殘留診斷試劑的研究現狀，及時開發出優于目前的、快速靈敏的檢測試劑可謂是當務之急。雖然農獸藥殘留分析的方法雖然有很多，但是利用免疫學技術進行分析是特異性最好、檢測時間最短的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高效快速檢測沙拉沙星的酶聯免疫試劑盒及檢測方法，主要用于食品檢測行業中沙拉沙星含量的檢測。

本發明的技術方案是：該檢測沙拉沙星的試劑盒是由 96 微孔的包被板，沙拉沙星標準品，抗沙拉沙星的包被抗體，酶標記的沙拉沙星抗原，濃縮洗滌液，顯色液 A，顯色液B 和終止液組成；所述的包被板配置有采用 1％明膠作為封閉液，抗體的稀釋液選用0.15mol/L 的磷酸鹽緩沖溶液，所述的濃縮洗滌液為含有 0.07％～ 0.1％吐溫的 Tris-HCL緩沖溶液，顯色液 A 為檸檬酸和檸檬酸鈉緩沖溶液，顯色液 B 為四甲基聯苯胺和二甲基亞砜、含甘油的溶液，所述的終止液為 2mol/L 的硫酸溶液。

所述沙拉沙星半抗原是將沙拉沙星和8-氨基辛酸通過酞化方一法得到的。

所述酶標記物的標記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酷酶，其中優選堿性磷酸酷酶；堿性磷酸酷酶標記的沙拉沙星半抗原可將堿性磷酸酷酶與沙拉沙星半抗原通過戊二醛法或過碘酸鈉法將酶交聯在沙拉沙星半抗原上。

單克隆抗體的制備

動物免疫：