[發明專利]馬杜霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201611158306.5
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN108226486A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 洪霞;杜霞;丁炎
• 申請（專利權）人: 南京億特生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明馬杜霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，涉及動物源食品獸藥殘留檢測技術領域。本發明的檢測卡外殼中的試紙條，由PVC膠板、樣品墊、膠體金結合墊、包被膜和吸水墊組成；膠體金膜為含馬杜霉素單克隆抗體的玻璃纖維素膜，包被膜是硝酸纖維素膜，其上設有T線和C線，T線包被有馬杜霉素蛋白質偶聯物，C線包被有羊抗鼠IgG抗體。本發明有效用于快速檢測馬杜霉素，方便、快捷、結果準確。

技術領域

本發明涉及谷物食品中農藥殘留檢測技術領域，特別是涉及馬杜霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法。

背景技術

馬杜霉素 英文名稱Maduramicin,又名馬度米星.是一種較新型的聚醚類一價單糖苷離子載體抗生素，本品抗球蟲譜廣對子孢子和第一代裂殖體均有抗球蟲活性。本品能有效控制6種常見的雞球蟲，對鴨球蟲病也有良好的預防效果。混飼，每1000 kg飼料5～10g馬杜霉素由美國氰胺公司于20世紀80年代開發，1992年我國開發成功并大批量生產，由于價格較低，對球蟲病具有良好的預防和治療作用，使馬杜霉素在臨床得到廣泛的應用。但該藥毒性較大，安全范圍窄，使用劑量非常接近雞的中毒量，超量使用易引起禽中毒。家禽馬杜霉素中毒一般為急性過程。急性死亡（1～ 2 d 內死亡）的動物一般會出現典型的中毒癥狀：東走西竄、站立不安、興奮亢進等神經癥狀，或水樣腹瀉、腿軟、行走及站立不穩。嚴重者兩腿麻痹，昏睡直至死亡。亞慢性中毒表現為減食甚至食欲廢絕，迅速消瘦，糞便呈現色澤變化，從青灰、淺綠、綠色至膽綠色，出現率約 20% 左右。家禽精神不振、蹲伏驅趕不動，甚至兩腳癱瘓、驅趕時跗關節著地，兩翅拍動、無力站立，甚至死亡。 在臨床應用時常因使用不當，造成家禽中毒，經濟損失較大。Ft%HWGE

現有技術對于馬杜霉素的檢測主要是氣相色譜-質譜法、高效液相色譜法等檢測方法，但這些技術的缺陷明顯：設備昂貴、操作復雜、難以推廣。所以，建立一種簡單、有效、適合基層使用的測定方法是極其必要的。本發明的目的是研制一種更適合企業進行現場檢測且快捷簡便、成本低廉的定性檢測方法。

發明內容

針對以上情況，本發明的目的就是為了克服現有技術存在的缺陷而提供一種馬杜霉素的免疫膠體金檢測卡及其制備方法，可有效解決能快速、簡便地檢測出馬杜霉素的問題。

本發明的馬杜霉素膠體金檢測卡，包括包被了單克隆抗體膠體金標記物的膠體金結合墊、包被了馬杜霉素-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纖維素膜、樣品墊、吸水墊、PVC膠板和塑料模具組成，在PVC膠板的一端依次粘附樣品墊、結合墊，中間黏貼硝酸纖維素膜，另一端粘附吸水墊。

本發明的馬杜霉素膠體金檢測卡的制備方法，是由以下步驟實現：

(1)膠體金溶液制備：取1 L 三角燒瓶1個，加入超純水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加熱煮沸后在持續攪拌的情況下加入1%檸檬酸三鈉(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，繼續攪拌加熱，當溶液的顏色完全變為透明的紫紅色時，維持5 min后停止加熱，補水至原體積，冷卻至室溫，2-8℃保存備用；

(2)抗體的預處理：將要標記的馬杜霉素抗體在1000 r/min, 4℃條件下，離心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀釋成1 mg/ml，過0.22μm濾膜；