[發明專利]一種具有漆酶活性的大球蓋菇活性蛋白的制備方法

有效

• 申請號: 201611157373.5
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN108220258B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 錢磊;張志軍;訾惠君;王文治;翟宏偉;劉建華
• 申請（專利權）人: 天津市農業科學院
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;A61K38/44;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種具有漆酶活性的大球蓋菇活性蛋白，其特征在于，所述的大球蓋菇活性蛋白的相對分子質量為40KD；

其制備方法包括以下步驟：

(1)將干燥的大球蓋菇子實體粉碎，過20～100目篩，即子實體粗粉；

(2)將子實體粗粉按1:20～1:40(W/V)的比例，溶解于0.9％的氯化鈉溶液，置于超聲波提取器中，超聲波頻率控制在200W-400W，2～10℃處理4～8h，6000～10000rpm離心10～30min，收集上清液，即子實體浸提液；

(3)向子實體浸提液中加入硫酸銨至飽和度為60～80％，2～10℃處理4～8h，6000～10000rpm離心10～30min，收集沉淀，即蛋白粗提物；

(4)將蛋白粗提物按1:5～1:15(W/V)的比例溶解于去離子水中，2～10℃、3000～4000rpm離心濃縮20～40min，反復2～4次，即蛋白濃縮液；

(5)將蛋白濃縮液按1:10～1:20(W/V)的比例，溶解于10～100mMTris、pH7.0～9.0的TrisA緩沖液中，進行陰離子交換柱層析，用10～100mMTris、1MNaCl、pH7.0～9.0的TrisB緩沖液梯度洗脫，收集具有漆酶活性的洗脫峰；

(6)將洗脫峰進行凝膠過濾層析，用10～100mMTris、100～500mMNaCl、pH7.0～9.0的TrisC緩沖液洗脫，收集具有漆酶活性的洗脫峰；

(7)將洗脫峰在-20℃～-40℃、8～12帕的真空下進行凍干，獲得具有漆酶活性的大球蓋菇活性蛋白。

2.權利要求1所述的大球蓋菇活性蛋白在制備用于抗腫瘤活性的藥物中的用途。

3.根據權利要求2用途，其特征在于所述腫瘤為乳腺癌。

4.根據權利要求3所述的用途，其特征在于乳腺癌為乳腺癌細胞MCF7。