[發(fā)明專利]水稻小分子RNAosa-miR171b在抗水稻條紋葉枯病上的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611151143.8
• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號: CN108220290B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 燕飛;袁泉;佟愛仔;彭杰軍;魯宇文;趙晉平;鄭紅英;林林;程曄;陳劍平
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

本發(fā)明公開了水稻小分子RNA osa?miR171b在抗水稻條紋葉枯病上的應(yīng)用,本發(fā)明從水稻日本晴中高通量測序得到microRNA osa?miR171b，用該microRNA構(gòu)建到前體基因pre?miR528序列中。該microRNA前體在水稻中過量表達(dá)osa?miR171b，利用攜帶水稻條紋病毒的灰飛虱接種病毒后，轉(zhuǎn)基因株系和野生型對照相比發(fā)病率和死亡率均降低，發(fā)病癥狀有所緩解。因此，在水稻中超表達(dá)osa?miR171b對于提高水稻對水稻條紋葉枯病的耐受性具有重要意義，這為水稻耐受水稻條紋葉枯病分子育種提供新的資源和研究方法。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及植物基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種水稻小分子RNA osa-miR171b在水稻耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

水稻(Oryza sativa L.)是一種重要的糧食作物。水稻條紋葉枯病是通過灰飛虱(Laodelphax striatellus)傳播的重要水稻病毒病害，給農(nóng)業(yè)構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。

小分子RNA(microRNA)普遍存在于動植物體內(nèi)，對其靶基因起著轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的重要作用，從而調(diào)控生物體的許多性狀。microRNA調(diào)控植物體許多靶基因，其中一些靶基因參與植物對病毒的抗性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明小組發(fā)現(xiàn)，通過超表達(dá)microRNA可以提高水稻的抗病性，從而為培育抗病水稻提供了一個新的途徑。

一方面，本發(fā)明通過高通量測序得到長度為21nt水稻成熟microRNA，命名為osa-miR171b序列，其序列為：5’UGAUUGAGCCGUGCCAAUAUC 3’,(SEQ ID NO：1)。用該microRNA，osa-miR171b序列替換已知的osa-MIR528前體序列中的osa-miR528序列，得到人工miR171b序列osa-miR171b(SEQ ID NO：2)。經(jīng)化學(xué)合成該序列DNA后，將該DNA片段連接至雙元表達(dá)載體pCAMBIA1300UR(圖1)。將該載體轉(zhuǎn)化至EHA105農(nóng)桿菌,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化在水稻中超表達(dá)osa-miR171b，利用攜帶水稻條紋病毒的灰飛虱接種病毒后，轉(zhuǎn)基因株系和野生型對照相比發(fā)病率和死亡率均降低，發(fā)病癥狀有所緩解。因此，在水稻中超表達(dá)osa-miR171b能提高水稻對水稻條紋葉枯病的耐受性。

另一方面，本發(fā)明提供一段水稻小分子RNA osa-miR171b序列，該microRNA的核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示，其特征在，該小分子RNA通過轉(zhuǎn)基因水方法能夠制備耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻。

另一方面，本發(fā)明提供一種制備耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻的方法，其中，讓microRNA核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示的基因序列轉(zhuǎn)入到水稻中。

另一方面，本發(fā)明提供一段水稻小分子RNA osa-miR171b序列在制備耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻上的用途，其中，所述的RNA osa-miR171b為SEQ ID NO:1所示的序列。

另一方面，本發(fā)明提供水稻人工小分子RNA osa-miR171b序列，該microRNA的核苷酸序列為SEQ ID NO:2所示，其特征在于，該小分子RNA能夠通過轉(zhuǎn)基因方法制備耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻。

另一方面，本發(fā)明提供一種制備耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻的方法，其中，讓核苷酸序列為SEQ ID NO:2所示的基因序列轉(zhuǎn)入到水稻中。

另一方面，本發(fā)明提供水稻人工小分子RNA osa-miR171b基因序列在制備耐受水稻條紋病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻中的用途，其中，所述的基因序列為SEQID NO:2所示的序列。