[發明專利]沙門氏菌核酸快速檢測試劑盒、試紙及檢測方法

有效

• 申請號: 201611149351.4
• 申請日: 2016-12-14
• 公開（公告）號: CN106636387B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 杜欣軍;周天驕;李萍;王碩
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6804;C12Q1/10;C12R1/42
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種沙門氏菌核酸快速檢測試劑盒，其特征在于：包括正向引物invA-F:序列5’-ATTTCTATGTTCGTCATTCCATTACCTACC-3’, 反向引物invA-R:序列：5’-ATGTAGAACGACCCCATAAACACCAA-3’，用地高辛和生物素分別標記正向引物、反向引物的5’端，金標抗體，抗金標抗體種屬的抗體，和顯色物生物素的配體物質；

還包括解旋酶恒溫擴增體系，所述擴增體系包括10×Annealing Buffer、dNTP、MgSO₄、NaCl、Enzyme Mix；

所述顯色物生物素的配體物質為鏈霉親合素；

所述金標抗體為鼠抗地高辛抗體，抗金標抗體種屬的抗體為羊抗鼠二抗；

所述試劑盒還包括沙門氏菌核酸快速檢測試紙，包括樣品墊、金標墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，樣品墊一端與金標墊一端端部重疊，金標墊另一端與硝酸纖維素膜端部重疊，硝酸纖維素膜另一端部與吸水紙重疊，在硝酸纖維素膜間隔平行嵌裝有檢測線和質控線，檢測線在金標墊一側，質控線在檢測線與吸水紙端部之間；

所述金標墊上噴涂金標抗體，檢測線上包被顯色物生物素的配體物質，質控線上包被抗金標抗體種屬的抗體；

所述金標墊上噴涂鼠抗地高辛抗體的膠體金，檢測線上包被鏈霉親合素，鏈霉親合素濃度為2mg/mL，質控線上包被羊抗鼠二抗；

所述樣品墊為玻璃纖維，各部分重疊部分為2-10mm，在檢測試紙下部安裝PVC背板；

快速檢測試紙使用上樣展開液為添加0.1% BSA和0.1% Tween 20的PBS緩沖液，pH7.4。

2.一種權利要求1所述的試劑盒沙門氏菌核酸非診斷目的的快速檢測方法，其特征在于：其包括如下步驟：

⑴將鼠抗地高辛抗體作為金標抗體吸附于顯色物質膠體金顆粒上，形成穩定結構的結合體固定在金標墊上；

⑵鏈霉親和素作為標記物生物素的配體物質以線狀形式包被在硝酸纖維素膜上形成檢測線；

⑶將羊抗鼠抗體同樣以線狀形式包被在質控線上結合過多的金標抗體；

⑷正向引物5’端和反向引物5’端分別用地高辛和生物素修飾，當存在待測沙門核酸擴增產物時，在恒溫條件下進行核酸的擴增反應得到同時連接兩種標記物地高辛-目標片段-生物素的擴增產物；

⑸將步驟⑷產生的地高辛-目標片段-生物素首先與金標墊上膠體金顆粒包被的地高辛抗體結合，形成地高辛抗體-地高辛-目標片段-生物素顯色顆粒復合體；

⑹步驟⑸得到的顯色顆粒復合物在上樣緩沖液中通過毛細管作用沿纖維素膜向上移動至檢測線被受體鏈霉親合素捕獲得到地高辛抗體-地高辛-目標片段-生物素-鏈霉親合素復合體，在檢測線上沉降形成肉眼可視的顯色條帶，且未結合擴增產物的膠體金顆粒上包被的金標抗體與質控線上的羊抗鼠抗體結合，出現兩條顯色條帶即為陽性結果；

或者，當不存在沙門核酸擴增產物時，不發生上述步驟⑸-⑹，不能與金標墊上膠體金顆粒包被的地高辛抗體結合，顯色物質膠體金顆粒不能與檢測線上包被的物質結合形成顯色條帶，質控線上的羊抗鼠抗體與膠體金顆粒上包被的金標抗體結合出現一條顯色條帶即為陰性結果。