[發(fā)明專利]一種野西瓜硒多糖的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611149316.2
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN106589154B
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于淼;季宇彬;綦崢;辛國松
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱商業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 牟永林

1.一種野西瓜硒多糖的制備方法，其特征在于一種野西瓜硒多糖的制備方法按以下步驟進行：

一、野西瓜多糖的提取：將野西瓜干燥，然后加入95％的乙醇進行醇沉，醇沉3次，干燥后得到醇沉淀多糖；其中醇沉溫度為80～100℃，醇沉?xí)r間為2h～4h；

二、野西瓜粗多糖的制備：向步驟一得到的醇沉淀多糖中加水進行萃取，對萃取液脫水，然后依次用無水乙醇、丙酮和苯洗脫，干燥后得到多糖含量為80％的野西瓜粗多糖；

三、野西瓜粗多糖除蛋白：①將步驟二得到的多糖含量為80％的野西瓜粗多糖用蒸餾水溶解，配成飽和粗多糖水溶液Ⅰ；②向飽和粗多糖水溶液Ⅰ中加入質(zhì)量為飽和粗多糖水溶液Ⅰ質(zhì)量1％的木瓜蛋白酶，在溫度為50～70℃的水浴條件下酶解反應(yīng)1.5h～2.5h，酶解反應(yīng)后置于沸水中滅活8min～12min，然后加入氯仿和正丁醇的混合液，震蕩15min～25min，轉(zhuǎn)至分液漏斗中靜置25min～35min，除去水相與有機相之間的白色蛋白，得到剩余水相；③對剩余水相重復(fù)步驟②的操作至水相與有機相之間無白色蛋白，得到待濃縮水相；④對待濃縮水相進行濃縮，濃縮至原體積的40％～60％，得到濃縮后水相，然后加入4倍濃縮后水相體積的無水乙醇沉淀過夜，再依次用無水乙醇、丙酮和石油醚洗滌，干燥后得除蛋白野西瓜粗多糖；

所述氯仿和正丁醇的混合液中氯仿與正丁醇的體積比為4:1；

四、野西瓜粗多糖除色素及小分子：將步驟三得到的除蛋白野西瓜粗多糖用蒸餾水溶解，配成飽和粗多糖水溶液Ⅱ，然后加入氨水調(diào)節(jié)pH值至8～9，再加入過氧化氫，調(diào)節(jié)過氧化氫體積分?jǐn)?shù)為飽和粗多糖水溶液Ⅱ體積的10％，然后置于溫度為50～70℃的水浴條件下加熱反應(yīng)1.5h～2.5h，冷卻后裝入透析袋，先流水透析3天，再用蒸餾水透析1天后取出，然后在轉(zhuǎn)速為3000r/min～4000r/min的條件下離心8min～12min，除去沉淀后將溶液濃縮至原體積的40％～60％，得到脫出色素及小分子的野西瓜粗多糖濃縮液；

五、野西瓜多糖醇沉：將無水乙醇加入至步驟四得到的脫出色素及小分子的野西瓜粗多糖濃縮液中，沉淀靜置過夜，離心分離得到多糖沉淀，然后依次無水乙醇、丙酮和石油醚洗滌多糖沉淀，干燥后，得到醇沉后野西瓜多糖；

步驟五中所述無水乙醇與步驟四得到的脫出色素及小分子的野西瓜粗多糖濃縮液的體積比為10:100；

六、野西瓜多糖精提：采用DEAE-52柱對步驟五得到的醇沉后野西瓜多糖進行層析，然后用4倍柱體積的濃度為0.1mol/L的NaCl溶液作為洗脫劑進行洗脫，NaCl溶液流速為20mL/3min，收集洗脫液先用流水透析3天，再用蒸餾水透析至無Cl^-后冷凍干燥，得到野西瓜多糖，即CSPS；

七、野西瓜多糖的硒化：將步驟六得到的CSPS和Na₂SeO₃溶于0.5％硝酸水溶液中，混勻后得到混合液，然后將裝有混合液的三角燒瓶密封置于水浴中，在溫度為60～70℃和轉(zhuǎn)速為35r/min～45r/min的條件下反應(yīng)6.5h～7.5h，反應(yīng)完成后使其冷卻，然后用無水Na₂CO₃調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液的pH值至5～6，再用離心機在3000r/min～4000r/min的條件下離心8min～12min，將離心后的上清液置于透析袋中，流水透析至游離HSeO₃^-去除完全，然后將透析液濃縮至原體積的40％～60％，真空冷凍干燥后得到野西瓜硒多糖，即Se-CSPS；

所述CSPS與Na₂SeO₃的質(zhì)量比為1∶0.7～0.9；所述混合液中CSPS的濃度為0.008g/mL～0.012g/mL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野西瓜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟一中所述醇沉溫度為90℃，醇沉?xí)r間為3h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野西瓜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟三②中在溫度為60℃的水浴條件下酶解反應(yīng)2h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種野西瓜硒多糖的制備方法，其特征在于步驟三②中酶解反應(yīng)后置于沸水中滅活10min。