[發明專利]一種高靈敏度微米結構生物芯片的構建方法

在審

• 申請號: 201611143349.6
• 申請日: 2016-12-13
• 公開（公告）號: CN106596961A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 紀博知;蔣賢杰;余斌;鄧中平;戴立忠
• 申請（專利權）人: 湖南圣湘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/543;G01N33/531;B81C3/00;B01L3/00
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙)11363
• 代理人: 逯長明,許偉群

1.一種高靈敏度微米結構生物芯片的構建方法，其特征在于，包括：

S101：將玻璃片置于刻蝕液中，超聲震蕩后，取出所述玻璃片，清水洗滌120℃烘干2h，得到清洗后的玻璃片；

S102：將所述清洗后的玻璃片進行環氧基化反應，得到環氧基化玻璃片；

S103：將所述環氧基化玻璃片依次疊加，在所述環氧基化玻璃片的疊加區域加入PEG進行氨基化反應，得到氨基化玻璃片；

S104：利用乙醇胺封閉液對所述氨基化玻璃片未標記上的氨基化玻璃表面進行封閉反應，利用無水乙醇洗脫，得到封閉后的玻璃片；

S105：將所述封閉后的玻璃片進行生物素標記反應，利用無水乙醇洗脫，空氣吹干，得到生物素標記后的玻璃片；

S106：將所述生物素標記后的玻璃片進行標記光敏化合物S1818反應，得到預處理的玻璃片；

S107：采用生物微機電在所述預處理的玻璃片的表面構建3μm結構，得到生物芯片。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用生物微機電在所述預處理的玻璃片的表面構建3μm結構，得到生物芯片的步驟包括：

采用生物微機電在所述預處理的玻璃片的表面構建3μm結構；

利用GDPTS復合封閉劑對所述生物芯片的空白區域進行封閉反應。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述將所述清洗后的玻璃片進行環氧基化反應的步驟包括：

將所述清洗后的玻璃片置于γ-縮水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷溶液中，利用磁力攪拌器在25℃恒溫恒速300rpm攪拌，反應12h。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述在環氧基化玻璃片的疊加區域加入PEG進行氨基化反應的步驟包括，

在所述環氧基化玻璃片的疊加區域加入100μl的PEG，在25℃恒溫標記反應12h，洗脫，空氣吹干。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述將所述封閉后的玻璃片進行生物素標記反應的步驟包括：

將所述封閉后的玻璃片置于生物素溶液中，25℃恒溫恒速300rpm攪拌。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述將生物素標記后的玻璃片進行標記光敏化合物S1818反應的步驟包括：

將所述生物素標記后的玻璃片，真空吸附玻璃片離心機上，高速甩干標記光敏化合物S1818，之后95℃烘干4min。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述γ-縮水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷溶液為將5mlγ-縮水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷溶解于95ml的乙醇中。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PEG為PEG6000。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物素為N-琥珀酰亞胺基酯溶液,將10mgN-琥珀酰亞胺基酯溶解在100ml二甲基亞砜溶液中。

10.根據權利要求1-9任一項所述的方法，其特征在于，所述采用生物微機電在所述預處理的玻璃片的表面構建3μm結構的步驟包括：

生物微機電采用接觸性光刻技術在所述預處理的玻璃片的表面構建3μm結構。