[發明專利]一種利用桃膠凝膠板電泳完成古代絲織品測定的方法

有效

• 申請號: 201611138143.4
• 申請日: 2016-12-12
• 公開（公告）號: CN106596690B
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 彭志勤;古錦翠;王秉;萬軍民;胡智文
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 浙江納祺律師事務所 33257
• 代理人: 鄭滿玉

本發明公開了一種利用桃膠凝膠電泳完成古代絲織品測定的方法，將古代絲織品經過脫膠，溶解，脫鹽，透析，濃縮之后使用預先制備好的桃膠凝膠進行電泳實驗，其中桃膠凝膠具有空間網狀結構，經過一系列處理之后具有同瓊脂糖凝膠的作用，且對環境無污染無公害，具有很的大利用價值。將古代絲織品電泳結果采用凝膠內酶切的方法酶解，然后使用HPLC?MS/MS對其進行質譜分析，將結果與氨基酸序列數據庫進行對比，根據氨基酸序列得到古代絲織品的材料類型；本發明采用蛋白質組學方法測定古代絲織品，一方面靈敏度高，操作簡便；另一方面準確度高，樣品使用量少。

技術領域

本發明涉及一種古代絲織品測定的方法，更具體的說是涉及一種利用桃膠凝膠板電泳完成古代絲織品測定的方法。

背景技術

絲綢是中國古老文化的象征，絲綢文物是中華民族數千年文明史、科技發展史的珍貴實物見證，解決我國絲綢起源的問題不僅僅是探索華夏文明起源的需要，而且也是為“我國是世界上公認的絲綢起源地”這一說法提供更加信服的證據，目前對絲織品檢測常用的方法如傅里葉紅外光譜，拉曼光譜，X-射線衍射等檢測靈敏度低，受雜質干擾較大，主要適用于保存較好的絲織品分析。雖然也能為絲織品殘留物鑒定提供一些有用的材料但是很難對其做出準確的判斷，采用蛋白質組學進行古代絲織品的鑒定，使用SDS-PAGE凝膠電泳往往會出現紋理，“鬼帶”，條帶不均勻等現象影響電泳結果的判斷。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種快速，直觀，簡便的古代絲織品檢測方法，尤其利用桃膠凝膠完成電泳。

為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：一種利用桃膠凝膠板電泳完成古代絲織品測定的方法，方法采用步驟如下：

a)將采摘的干燥桃膠固體20～50g溶脹在水中，重復過濾直到液體澄清，加入鹽酸使其可以完全浸泡桃膠，控制水解溫度80～100℃，水解時間0.5～1h，制得桃膠多糖；

b)向桃膠液中加入質量分數為20～30％的H₂O₂溶液200～400ml對桃膠進行脫色處理，然后用截留分子量為3500～4000透析袋透析進行脫鹽處理，透析24～30h后使用聚乙二醇6000進行濃縮，放入100～300ml質量分數為0.5～1.5％的SDS溶液中浸泡6～8h；

c)在兩塊制膠玻璃板中間放上墊片，放上制膠架，擰緊制膠螺絲夾緊玻璃板，制得桃膠凝膠板備電泳操作使用；

d)稱取一份古代絲織品，以1:100的浴比在質量分數為0.5％的Na₂CO₃水溶液和質量分數為0.5～1.5％的SDS混合溶液中沸煮30min進行脫膠，共脫膠兩次，1h之后，將溶液和絲素分離，絲素用去離子水沖洗并在50～60℃的烘箱中烘干備用；

e)將脫膠烘干的絲素纖維放入預先配好的CaCl₂:H₂O:ethanol為1:8:2的混合溶液中，浴比為1：25，加熱到90～95℃蒸煮10～20min，獲得蠶絲溶液，冷卻過濾之后用截留分子量為8000～14000的透析袋透析，并每隔3～4h換一次水，70～72h后得到絲素蛋白溶液,使用聚乙二醇6000濃縮至原體積的1/3～2/3；

f)通過重泡漲上樣法將步驟e)得到的樣品用pH范圍為3.0～5.3的IPG膠條覆蓋，使用液體石蠟密封之后等電聚焦，加入質量分數為1.5～2％的二硫蘇糖醇溶液2～3ml和質量分數為2.2～2.8％的碘乙酰胺溶液4～5ml平衡15～20min，進行桃膠凝膠電泳，使用質量分數為0.25％的卡馬斯亮藍，質量分數為50％的乙醇，質量分數為10％的乙酸對膠條染色，觀察三組樣品的電泳圖像；