[發明專利]鐵皮石斛蒴果/種子的長期保存方法

有效

• 申請號: 201611132767.5
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106717266B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 姜維梅;傅承新
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00;A01N3/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

本發明公開了一種鐵皮石斛蒴果的保存方法，將收獲的鐵皮石斛果實分成完整果實和開裂果實，對完整果實依次進行以下步驟：果實消毒；果實的脫水處理；脫水后蒴果進行水分含量的檢測；將被濾紙包裹的果實放入裝有硅膠的密封袋中，且將至少一個的密封袋放入裝有硅膠的密封容器中，將整個密封容器置于?80℃～?20℃保存。本發明還公開了相應的開裂果實的保存方法。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種珍稀蘭科名貴藥材鐵皮石斛蒴果及種子的長期保存方法。

背景技術

鐵皮石斛是蘭科(Orchidaceae)石斛屬多年生附生蘭。《中國藥典》(2010版)將鐵皮石斛作為單列藥材品種，明確其基源植物為蘭科植物鐵皮石斛(Dendrobium officinaleKimura et Migo)，其干燥莖或新鮮莖藥用(國家藥典委員會，2010)。鐵皮石斛含有多糖、芪類、生物堿、氨基酸和微量元素等多種成分，具有增強免疫、抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、降血糖和養陰生津等多種生物活性(李玲等，2011)。

目前關于鐵皮石斛組織培養所采用的外植體主要是種子、莖段、根尖、幼芽、葉片等，通過上述外植體先誘導原球莖，然后生產組培苗的方式居多，占76％以上(范俊安等，1999；杜剛等，2007)，而這些原球莖的獲得有80％是以種子為外植體誘導的(金銀兵，2009；李榮珍，2012)。所以真正在生產上大規模使用的外植體是種子，相比其他的繁殖方式，種胚產生原球莖的增殖途徑是叢芽增殖方式的數十倍，對鐵皮石斛的快速繁殖具有重要意義(蔣慧萍，2009；馮耀文等，2013)。通過莖段、根尖、葉片誘導類原球莖的方式，不適合大規模的生產，類原球莖繁殖多代后，分化成苗的潛力降低。

采用種子作為外植體，從種子播種到形成可以移栽的幼苗需要6-8個月的時間。鐵皮石斛果實的成熟期一般在10月下旬至11月上旬。鐵皮石斛蒴果以成熟未開裂前采收最好，種子易采收及消毒，且發芽率高。若等到果實成熟開裂時采收，不僅種子難以收集與消毒，且種子發芽率降低。將果實放入4℃的冰箱中保存，保存時間也不能超過1個月，否則易發霉腐爛或降低發芽率(蔣慧萍，2009)。因此在進行工廠化生產時，如何保存果實或種子，如何根據供苗時間自主地選擇種子的播種時間就顯得格外重要。關于鐵皮石斛種子的保存，僅見張治國等(1997)、王君暉等(1999)的干凍法保存，即通過硅膠脫水后的種子，不經過玻璃化保護劑PVS2處理，在液氮中保存24小時或1個月，種子萌發率為92％-95％，與未經冷凍的種子的萌發率一致。在石斛屬的其他種類中，Renato等(2014)報道了石斛雜交種“Dong Yai”的成熟種子放入PVS2溶液中處理1-3小時，再投入液氮中保存60分鐘后取出，進行種子萌發實驗。結果表明種子的萌發率最高為58％，流式細胞分析表明冷凍保存的種子萌發產生的幼苗沒有發生染色體的變化。

上述研究中，種子保存時間最長的為1個月，并且要使用液氮，對于一般的企業操作起來不是很方便，因此研究經濟、有效的鐵皮石斛果實或種子的保存方法尤為重要，這不僅對于種質資源的保存有重要意義，而且可以做到取材不受季節影響，有利于工廠化種苗的生產。

上文中涉及的參考文獻如下：

1、杜剛,楊海英,朱紹林等.鐵皮石斛種子誘導成苗試驗.中藥材,2007,30(10):1207-1208；

2、范俊安,張艷,李泉森,等.鐵皮石斛種子培養試驗研究.重慶中草藥研究,1999,(40):48-49；

3、國家藥典委員會.中華人們共和共藥典.北京:中國醫藥科技出版社,2010；

4、馮耀文,李澤生,耿秀英,等.鐵皮石斛組培苗工廠化生產技術關鍵問題探討.熱帶農業科技,2013,36(3):30-32；

5、蔣慧萍,庾韋花,張向軍,等.鐵皮石斛種子胚培養的產業化研究.江蘇農業科學,2009,(2):72-75；

6、金銀兵.鐵皮石斛的生物學特性與開花授粉技術研究.安徽農業科學,2009,37(11):5280-5282；