[發(fā)明專利]利用PCR-RFLP檢測綿羊FTH-1基因單核苷酸多態(tài)性的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611132291.5
• 申請日: 2016-12-09
• 公開（公告）號: CN106755370B
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樂祥鵬;呂佳穎;李發(fā)弟;王維民;李萬宏
• 申請（專利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/683
• 分類號: C12Q1/683
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 徐文權(quán)

1.一種綿羊FTH-1基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法在綿羊輔助選擇和分子育種中的應(yīng)用，其特征在于：所述的綿羊FTH-1基因的單核苷酸多態(tài)性的檢測方法，包括以下步驟：

以待測綿羊全基因組DNA為模板，以引物對P為引物，PCR擴增綿羊FTH-1基因片段；用限制性內(nèi)切酶XspI酶切PCR擴增產(chǎn)物之后，再對酶切后的擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳；根據(jù)電泳結(jié)果鑒定綿羊FTH-1基因上單核苷酸多態(tài)性位點的基因型；

所述的引物對P為：

上游引物：5’- TCCATAGTAGAGACGGTTCC -3’ ；

下游引物：5’- GCACAAAAGACTAAAGCCC -3’ ；

所述的單核苷酸多態(tài)性位點表現(xiàn)為A或G的單核苷酸多態(tài)性，具有AA、AG以及GG三種基因型，電泳結(jié)果分別為：AA型表現(xiàn)為152 bp和326 bp兩個條帶；AG型表現(xiàn)為478 bp、326 bp和152 bp三個條帶；GG型表現(xiàn)為478 bp一個條帶；

所述綿羊選自湖羊，GG基因型為一個提高產(chǎn)羔性狀育種速度的分子遺傳標(biāo)記。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：建立基因型為GG純合型的綿羊群體，提高綿羊產(chǎn)羔率。

3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的PCR擴增反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸30 s，34個循環(huán)；72℃延伸10 min。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5-3.0%。