[發明專利]一種水痘?帶狀皰疹病毒糖蛋白E胞外區蛋白的制備方法

在審

• 申請號: 201611119488.5
• 申請日: 2016-12-08
• 公開（公告）號: CN107022559A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發明（設計）人: 李春明;徐俊峰;雙慧;李海燕;朱曉文;王麗;沈紅杰
• 申請（專利權）人: 長春祈健生物制品有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C07K14/04;A61K39/295;A61K39/25;A61P31/22;C12R1/19
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種重組質粒載體，由已優化為大腸桿菌偏愛密碼子的水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E胞外區基因與表達載體pET-21b連接構建而成，其核酸序列如SEQ NO.1所示，其對應的氨基酸序列如SEQ NO.2所示。

2.一種轉化體，其特征在于由權利要求1所述的重組質粒載體轉化大腸桿菌BL21(DE3)獲得。

3.一種制備水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E胞外區蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）以優化為大腸桿菌偏愛密碼子的合成質粒為模板，用兩端設計為Nhe I和EcoR I酶切位點的引物進行PCR擴增，純化PCR產物；

正向引物為（5'-3'）：TCCTAGCTAGCATGACCAATCCGGTTCGCGCCAGCGTGC；

反向引物為（5'-3'）：TTCCGGAATTCTTAATGATGATGATGATGATGACGC AGCA

GCGGGCTTGTACCCGGAT；

2）將步驟1）獲得的PCR產物和pET-21b載體用內切酶Nhe I和EcoR I雙酶切，再將酶切產物連接，構建重組質粒載體；將重組質粒載體轉化大腸桿菌感受態細胞，經篩選得到陽性克隆；

3）將陽性克隆質粒轉入BL21（DE3）表達菌中，挑選克隆，誘導表達，獲得陽性表達菌；

4）陽性表達菌大量擴增，在37℃用0.1-10mMIPTG誘導4-6h，可獲得VZV-gE胞外區蛋白。

4.一種水痘疫苗或者帶狀皰疹疫苗，是由按照權利要求3制備水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E胞外區蛋白方法制備的VZV-gE胞外區蛋白抗原成分和疫苗佐劑配制而成。

5.一種聯合疫苗或者多價疫苗，含有按照權利要求3制備水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E胞外區蛋白方法制備的VZV-gE胞外區蛋白抗原成分，與疫苗佐劑配制而成。