[發(fā)明專利]一種許氏平鮋抗菌肽BS20及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611112813.5
• 申請(qǐng)日: 2016-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106749534B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張敏;劉永;岳斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/08
• 分類號(hào): C07K7/08;A61K38/10;A61P31/04
• 代理公司: 青島華慧澤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37247
• 代理人: 馬千會(huì);沙莎

本發(fā)明涉及一種抗菌肽BS20及其應(yīng)用，具體涉及一種抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。該抗菌肽可有效殺傷藤黃微球菌和副溶血弧菌兩種魚(yú)類致病菌。本發(fā)明的抗菌肽經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證效果優(yōu)異。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)及微生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是一種許氏平鮋脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)/殺菌/通透性增加蛋白(BPI)的衍生抗菌肽BS20及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的疾病防治以大量使用抗生素藥物為主，由此產(chǎn)生了一系列的負(fù)面影響，如水產(chǎn)動(dòng)物藥物殘留，病原菌耐藥性增強(qiáng)、生態(tài)平衡被破壞等，嚴(yán)重影響了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。抗菌肽是機(jī)體天然免疫的重要組成部分，具廣譜抗菌活性，并且其殺菌機(jī)制不易使病原產(chǎn)生耐藥性，不會(huì)產(chǎn)生藥物殘留，有非常廣闊的應(yīng)用前景。魚(yú)類脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)/殺菌/通透性增加蛋白(BPI)是脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白/LPS結(jié)合蛋白家族的成員，目前研究證實(shí)，其N端重組蛋白或衍生肽對(duì)革蘭氏陰性菌具顯著殺菌活性。但是，該蛋白在魚(yú)類中的抗菌功能研究非常欠缺。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述缺陷，本發(fā)明一方面提供了一種抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽的序列如SEQ ID No.1所示。

進(jìn)一步地，本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了如上所述的抗菌肽在制備抑制細(xì)菌的藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，所述細(xì)菌為魚(yú)類致病菌，優(yōu)選為藤黃微球菌和副溶血弧菌。

有益效果

本發(fā)明的抗菌肽具有高效抑菌作用，可以有效抑制兩種魚(yú)類致病菌，因此可以應(yīng)用于魚(yú)類病害防治。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例旨在對(duì)本發(fā)明進(jìn)行舉例描述，而非以任何形式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。

實(shí)施例1

本發(fā)明的抗菌肽BS20的序列如SEQ ID No.1所示。

SEQ ID No.1為：RMHGNWRVKYLRIIKDSGSF

（a）序列特征：

●長(zhǎng)度：20

●類型：氨基酸序列

●鏈型：?jiǎn)捂?/p>

●拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)：線性

（b）分子類型：蛋白質(zhì)

（c）假設(shè)：否

（d）反義：否

（e）最初來(lái)源：人工合成

本實(shí)施例合成的抗菌肽BS20按照Fmoc固相多肽合成法，最終得到純度大于90%的抗菌肽BS20。合成時(shí)將一個(gè)Fmoc-氨基酸衍生物共價(jià)交聯(lián)到樹(shù)脂上，經(jīng)過(guò)樹(shù)脂溶脹，脫保護(hù)，稱料，投料，反應(yīng)后洗滌，檢測(cè)，合成完畢后的洗滌和干燥后再連接下一個(gè)氨基酸，直至連完最后一個(gè)氨基酸， 即得到抗菌肽BS20的序列，最后脫除N端Fmoc保護(hù)的氨基酸上面的保護(hù)基Fmoc，使N端裸露出來(lái)，并切除樹(shù)脂，即得到純化的抗菌肽BS20。經(jīng)驗(yàn)證為如SEQ ID No.1所示的序列，本實(shí)施例的抗菌肽由上海吉爾多肽有限公司（上海，中國(guó)）合成。

實(shí)施例2

抗菌肽BS20的應(yīng)用

1）藤黃微球菌和副溶血弧菌

在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)藤黃微球菌和副溶血弧菌分別至OD₆₀₀為0.8, 然后室溫離心（5000g） 5 min。收集菌體，將其懸浮于PBS中至終濃度為1x10⁶ CFU/ml。