[發明專利]一種堿性磷酸酶催化的化學發光底物

在審

• 申請號: 201611112014.8
• 申請日: 2016-12-07
• 公開（公告）號: CN106855517A
• 公開（公告）日: 2017-06-16
• 發明（設計）人: 李明勇;姜雪蓮;龔小貴;黃金浪;曹文軍;黃偉
• 申請（專利權）人: 湖南遠璟生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種與堿性磷酸酶發生催化反應的化學發光底物，屬于化學發光免疫分析檢測的技術領域。

技術背景

化學發光酶疫分析包含了免疫化學反應和化學發光反應兩個部分。免疫分析系統是將酶標記在抗原或抗體上，經過抗原與抗體特異性反應形成抗原－抗體免疫復合物?；瘜W發光分析系統是在免疫反應結束后，加入酶的發光底物，化學發光物質經酶催化后，形成一個處于激發態的中間體，會發射光子釋放能量以回到穩定的基態，發光強度可以利用發光信號測量儀器進行檢測。待測物質濃度因為與發光強度成一定的關系而實現檢測目的。

堿性磷酸酶在化學發光酶疫分析應用比較廣泛，目前使用最多的發光底物是1，2－二氧環己烷，主要是AMPPD及其衍生物。此類物質大多為國外專利產品，價格昂貴、不易購買，且一般到達平臺期時間長（＞10分鐘）。

堿性磷酸酶能催化二氫吖啶磷酸酯類化合物反應并產生化學發光，此種反應速度快，發光到達平臺期時間短，但是靈敏度較低（≤10^-6moL）。

因此，亟待開發出一種配方簡單、價格比國外產品便宜、到達平臺期時間短、靈敏度高的化學發光底物，以提高臨床免疫檢測速度，縮短檢測時間。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明公開了一種配方簡單、價格比國外產品便宜、到達平臺期時間短、靈敏度高的堿性磷酸酶的化學發光底物。

本發明涉及的發光底物在和堿性磷酸酶混合后，被堿性磷酸酶催化產生不穩定的中間態化合物，此中間態化合物回歸到基態時會發出450nm的光，發光底物中添加的表面活性劑，在中間態化合物周圍形成膠束增加發光率，金屬離子保持堿性磷酸酶的活性，提高催化效率，還原劑可維持發光底物的穩定。這些方式可以提高發光底物的靈敏度和穩定性。

一種堿性磷酸酶催化的化學發光底物，其特征在于：它含有化合物Ⅰ：3,6-(二甲胺基)吖啶，化學結構式如下：

進一步的，它還含有化合物Ⅱ：9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）-10-甲基-9,10-二氫化吖啶二鉀鹽，化學結構式如下：

進一步的，它還含有表面活性劑，所述表面活性劑優選Triton X-100、Triton X-405、吐溫-80中的一種或多種，所述表面活性劑最優選的為Triton X-100。

進一步的，它還含有還原劑，所述還原劑優選二硫蘇糖醇（DTT）、β-巰基乙醇、亞硫酸鈉、抗壞血酸中的一種或多種，所述還原劑最優選的為二硫蘇糖醇（DTT）。

進一步的，它還含有緩沖體系，所述緩沖體系優選Tris-鹽酸緩沖體系或2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖體系，所述緩沖體系最優選的為Tris-鹽酸緩沖體系。

進一步的，它還含有金屬離子以維持堿性磷酸的活性，優選的鋅離子、鎂離子。

進一步的，所述化合物Ⅰ的濃度為10mg/L～100mg/L，優選的濃度為25mg/L～50mg/L。

進一步的，所述化合物Ⅱ的濃度為100mg/L～1g/L，優選的濃度為200mg/L～500mg/L。

進一步的，所述表面活性劑的濃度為0.01%～0.1%，優選的濃度為0.01%～0.05%。

進一步的，所述還原劑劑的濃度為0.1%～1%，優選的濃度為0.1%～0.5%。

進一步的，所述緩沖體系的濃度為10mM/L～500mM/L，PH值為7.0～9.0，優選的濃度為50mM/L～200mM/L，PH值為8.0～8.5。

進一步的，所述金屬離子的濃度為1mM/L～10mM/L，優選的濃度為1mM/L～5mM/L。

本發明一種與堿性磷酸酶發生催化反應的化學發光底物，含有3,6-(二甲胺基)吖啶、9-（3’-乙氧苯基硫代磷酸氧亞甲基）-10-甲基-9,10-二氫化吖啶二鉀鹽、堿性藍54、表面活性劑、還原劑等，本發明的化學發光底物液配方簡單、價格比國外產品便宜、到達平臺期時間短（＜2sec）、靈敏度高（≥10^-19moL）。

附圖說明

圖1為4種不同發光底物到達平臺期時間對比圖。

具體實施方式

下面結合實例進一步說明本發明，本發明的優點和特點將被描述的更清楚。但是，應該可以理解，本實例僅僅是本發明的一種范例，并不會對本發明的范圍做任何限制。

實施例1

YJAPS的配方1（PH8.0），具體見表1：

表1