[發(fā)明專利]一種用于測定三碘甲狀腺原氨酸的試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611110779.8
• 申請日: 2016-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN106526169B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李玲
• 申請（專利權(quán)）人: 四川沃文特生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 成都頂峰專利事務(wù)所(普通合伙) 51224
• 代理人: 楊俊華

本發(fā)明提供了一種用于測定三碘甲狀腺原氨酸的試劑盒，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中T3免疫測定試劑的特異性和靈敏度方面都比較差的問題。一種用于測定三碘甲狀腺原氨酸的試劑盒，包括羊單抗包被的磁珠、ANS解離劑和酶工作液；羊單抗包被的磁珠上標(biāo)記有生物素。本發(fā)明采中包含羊單抗包被的磁珠，磁微粒(磁珠)上包被的是生物素的抗體，抗體為羊的單克隆抗體，試劑盒的特異性和靈敏度都比之前的T3免疫測定試劑高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種試劑盒，尤其涉及一種用于測定三碘甲狀腺原氨酸的試劑盒。

背景技術(shù)

三碘甲狀腺原氨酸(T3)屬于小分子項(xiàng)目，現(xiàn)有T3免疫測定試劑的抗體一般為多克隆抗體或鼠的單克隆抗體，在特異性和靈敏度方面都有所欠缺。現(xiàn)有技術(shù)沒有稀釋待標(biāo)記抗體至固定濃度，標(biāo)記微量抗體時(shí)操作不方便，同時(shí)批間差異大，不同批次的試劑盒功能差距較大，造成穩(wěn)定性較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種用于測定三碘甲狀腺原氨酸的試劑盒，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中T3免疫測定試劑的特異性和靈敏度方面都比較差的問題。

為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種用于測定三碘甲狀腺原氨酸的試劑盒，包括羊單抗包被的磁珠、ANS解離劑和酶工作液；羊單抗包被的磁珠上標(biāo)記有生物素。ANS解離劑為含ANS的解離劑(ANS：8-苯胺-1-萘磺酸8-Anilino-1-naphthalenesulfonic acid)。

進(jìn)一步，所述羊單抗包被的磁珠的制備方法為：將羊單抗稀釋到設(shè)定的濃度，對(duì)稀釋后的羊單抗進(jìn)行生物素標(biāo)記獲得生物素抗體，將生物素抗體包被在裸磁珠上獲得羊單抗包被的磁珠；所述設(shè)定的濃度為固定值。

在對(duì)羊單抗標(biāo)記之前，將羊單抗稀釋到特定的濃度，可以提高試劑盒的穩(wěn)定性，不同批次的試劑盒功能相近。

進(jìn)一步，設(shè)定的濃度在0.1mg/mL～0.6mg/mL內(nèi)取值。

羊單抗稀釋到特定的濃度在該范圍內(nèi)時(shí)，試劑盒的效價(jià)較高，而且穩(wěn)定性好。

進(jìn)一步，所述羊單抗包被的磁珠的制備方法為：

A、采用PBS緩沖液對(duì)羊單抗透析，取出透析完畢后的羊單抗；將透析完畢后取出的羊單抗稀釋到設(shè)定的濃度；

B、將BNHS溶于DMSO中，配置成BNHS溶液；其中BNHS(N-羥基琥珀酰亞胺生物素酯；EZ-Link NHS-LC-Biotin，50mg，廠家：Thermo Prod#21336)；

C、將稀釋后的羊單抗和BNHS溶液混合并反應(yīng)，反應(yīng)設(shè)定時(shí)間后，加入Tris緩沖液終止反應(yīng)，獲得生物素抗體；

E、采用PBS緩沖液對(duì)生物素抗體進(jìn)行透析；

F、取出透析后的生物素抗體，生物素抗體包被裸磁珠，獲得羊單抗包被的磁珠。

進(jìn)一步，所述羊單抗包被的磁珠的制備方法為：

A、采用0.1～0.3mol/L的PBS緩沖液對(duì)的羊單抗透析，透析的溫度為2～8℃；取出透析析完畢后的羊單抗，將羊單抗稀釋到設(shè)定的濃度；

B、將BNHS溶于DMSO中，配置成8～12mmol/L的BNHS溶液；

C、將步驟A解析后的羊單抗和步驟B配制的BNHS溶液混合并反應(yīng)28～33分鐘；

D、用0.8～1.2mol/L的Tris緩沖液終止步驟C的反應(yīng)；獲得生物素抗體；

E、采用濃度為0.1～0.3mol/L的PBS緩沖液對(duì)生物素抗體進(jìn)行透析，透析的溫度為2～8℃；

F、向透析后的生物素抗體加入丙三醇，生物素抗體與丙三醇體積比為4:5～5:4；