[發(fā)明專利]一種柳樹(shù)育種材料的超低溫保存復(fù)蘇方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611110175.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106576965A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李敏;張健;王瑩;李玉娟;談峰;張遠(yuǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): A01G7/06
• 分類號(hào): A01G7/06
• 代理公司: 北京紐盟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙)11456
• 代理人: 許玉順

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及柳樹(shù)育種材料保存技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種柳樹(shù)育種材料的超低溫保存復(fù)蘇方法。

背景技術(shù)

柳樹(shù)屬于廣生態(tài)幅植物，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性很廣，喜光，喜濕，耐寒，是中生偏濕樹(shù)種。但一些種也較耐旱和耐鹽堿，在生態(tài)條件較惡劣的地方能夠生長(zhǎng)，在立地條件優(yōu)越的平原沃野，生長(zhǎng)更好。一般壽命為20-30年，少數(shù)種可達(dá)百年以上。在柳樹(shù)人工雜交育種工作，育種材料只能在每年的3月份可以使用，如雜交失敗也只能等第二年，我們?cè)?a title="鉆瓜專利網(wǎng)">專利在“一種柳樹(shù)育種材料超低溫保存方法”的基礎(chǔ)上，解決超低保存后解凍復(fù)蘇再次利用的問(wèn)題。使柳樹(shù)育種材料能在任何時(shí)間，在一定的條件得以使用。

現(xiàn)有技術(shù)中柳樹(shù)育種材料保存復(fù)蘇方法繁瑣，復(fù)蘇后存活率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種柳樹(shù)育種材料的超低溫保存復(fù)蘇方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種柳樹(shù)育種材料的超低溫保存復(fù)蘇方法,包括以下步驟：

A、將育種材料解凍：將錫箔紙包裹柳樹(shù)育種材料從液氮中快速取出后，在恒溫水浴中快速振動(dòng)解凍；

B、恒溫清洗育種材料：去除錫箔紙，用濾紙快速吸干柳樹(shù)育種材料表面的防凍液后，放入恒溫洗滌液中浸泡柳樹(shù)育種材料；

C、常溫浸泡育種材料：將步驟B清洗后的育種材料再用洗滌液在常溫下浸泡柳樹(shù)育種材料；

D、育種材料根部培育：濾紙吸干柳樹(shù)育種材料表面洗滌液后，根部放入萌動(dòng)培養(yǎng)液中，在溫度25℃-30℃，濕度70%-75%，暗培養(yǎng)5d-6d；

E、育種材料培養(yǎng)：5d后直接放入hongland營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)pH至6.7，在光照強(qiáng)度為1800Lx和光暗周期12/12h，溫度25℃，濕度70%的條件下培養(yǎng)，1周后直接用于室內(nèi)雜交育種材料。

優(yōu)選的，所述步驟A中水浴溫度為40℃-45℃；解凍時(shí)間為5min-8min。

優(yōu)選的，所述步驟B中洗滌液為1.0mol/L-1.5 mol/L海藻糖，0.4mol/L-0.7 mol/L牛血清蛋白，其余為MS基本培養(yǎng)液。

優(yōu)選的，所述步驟B中洗滌液溫度為20℃-25℃；浸泡時(shí)間為30min-35min。

優(yōu)選的，所述步驟C中常溫浸泡時(shí)間為20min-25min。

優(yōu)選的，所述步驟D中萌動(dòng)培養(yǎng)液為0.8g/L-1.0 g/L葡萄糖，0.6g/L-0.8g/L牛血清蛋白，0.4g/L -0.6 g/LKCl，35.5 mg/L -36.5 mg/L Na₂HPO₄，其余為hongland營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)pH至6.7-6.9。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明能夠進(jìn)行快速解凍復(fù)蘇柳樹(shù)育種材料，能保存原有材料的活性，達(dá)到長(zhǎng)期供應(yīng)進(jìn)行柳樹(shù)室內(nèi)雜交試驗(yàn)育種材料。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例一：

本發(fā)明提供一種技術(shù)方案：一種柳樹(shù)育種材料的超低溫保存復(fù)蘇方法,包括以下步驟：

A、將育種材料解凍：將錫箔紙包裹柳樹(shù)育種材料從液氮中快速取出后，在恒溫水浴中快速振動(dòng)解凍；

B、恒溫清洗育種材料：去除錫箔紙，用濾紙快速吸干柳樹(shù)育種材料表面的防凍液后，放入恒溫洗滌液中浸泡柳樹(shù)育種材料，洗滌液為1.5 mol/L海藻糖， 0.7 mol/L牛血清蛋白，其余為MS基本培養(yǎng)液；

C、常溫浸泡育種材料：將步驟B清洗后的育種材料再用洗滌液在常溫下浸泡柳樹(shù)育種材料；

D、育種材料根部培育：濾紙吸干柳樹(shù)育種材料表面洗滌液后，根部放入萌動(dòng)培養(yǎng)液中，在溫度30℃，濕度75%，暗培養(yǎng)6d，萌動(dòng)培養(yǎng)液為1.0 g/L葡萄糖， 0.8 g/L牛血清蛋白， 0.6 g/LKCl， 36.5 mg/L Na₂HPO₄，其余為hongland營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)pH至6.9；

E、育種材料培養(yǎng)：5d后直接放入hongland營(yíng)養(yǎng)液，調(diào)pH至6.7，在光照強(qiáng)度為1800Lx和光暗周期12/12h，溫度25℃，濕度70%的條件下培養(yǎng)，1周后直接用于室內(nèi)雜交育種材料。

本實(shí)施例中，步驟A中水浴溫度為40℃；解凍時(shí)間為5min。

本實(shí)施例中，步驟B中洗滌液溫度為20℃；浸泡時(shí)間為30min。