[發明專利]一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法

在審

• 申請號: 201611110175.3
• 申請日: 2016-12-06
• 公開（公告）號: CN106576965A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 李敏;張健;王瑩;李玉娟;談峰;張遠
• 申請（專利權）人: 江蘇沿江地區農業科學研究所
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06
• 代理公司: 北京紐盟知識產權代理事務所(特殊普通合伙)11456
• 代理人: 許玉順

1.一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法,其特征在于：包括以下步驟：

A、將育種材料解凍：將錫箔紙包裹柳樹育種材料從液氮中快速取出后，在恒溫水浴中快速振動解凍；

B、恒溫清洗育種材料：去除錫箔紙，用濾紙快速吸干柳樹育種材料表面的防凍液后，放入恒溫洗滌液中浸泡柳樹育種材料；

C、常溫浸泡育種材料：將步驟B清洗后的育種材料再用洗滌液在常溫下浸泡柳樹育種材料；

D、育種材料根部培育：濾紙吸干柳樹育種材料表面洗滌液后，根部放入萌動培養液中，在溫度25℃-30℃，濕度70%-75%，暗培養5d-6d；

E、育種材料培養：5d后直接放入hongland營養液，調pH至6.7，在光照強度為1800Lx和光暗周期12/12h，溫度25℃，濕度70%的條件下培養，1周后直接用于室內雜交育種材料。

2.根據權利要求1所述的一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法,其特征在于：所述步驟A中水浴溫度為40℃-45℃；解凍時間為5min-8min。

3.根據權利要求1所述的一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法,其特征在于：所述步驟B中洗滌液為1.0mol/L-1.5 mol/L海藻糖，0.4mol/L-0.7 mol/L牛血清蛋白，其余為MS基本培養液。

4.根據權利要求1所述的一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法,其特征在于：所述步驟B中洗滌液溫度為20℃-25℃；浸泡時間為30min-35min。

5.根據權利要求1所述的一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法,其特征在于：所述步驟C中常溫浸泡時間為20min-25min。

6.根據權利要求1所述的一種柳樹育種材料的超低溫保存復蘇方法,其特征在于：所述步驟D中萌動培養液為0.8g/L-1.0 g/L葡萄糖，0.6g/L-0.8g/L牛血清蛋白，0.4g/L -0.6 g/LKCl，35.5 mg/L -36.5 mg/L Na₂HPO₄，其余為hongland營養液，調pH至6.7-6.9。