[發(fā)明專利]修飾肽的展示在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611109795.5 | 申請日: | 2011-07-29 |
| 公開(公告)號: | CN107058285A | 公開(公告)日: | 2017-08-18 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | G·克里斯蒂安森 | 申請(專利權(quán))人: | 米蒂生物系統(tǒng)有限公司 |
| 主分類號: | C12N15/10 | 分類號: | C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司: | 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44205 | 代理人: | 江側(cè)燕 |
| 地址: | 奧地利*** | 國省代碼: | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 修飾 展示 | ||
1.建立展示肽的可復(fù)制基因包庫的方法,所述肽在氨基酸側(cè)鏈內(nèi)具有至少一個分子內(nèi)環(huán)鍵,所述方法包括
a)提供編碼肽變體的核酸序列集;
b)將所述核酸序列集連接到可復(fù)制基因包的基因內(nèi);
c)在所述可復(fù)制基因包表面上展示對應(yīng)的初級肽序列,得到初級庫;及
d)采用PTM酶對所述初級庫進(jìn)行酶促加工,得到展示所述肽變體環(huán)狀結(jié)構(gòu)的成熟庫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中所述可復(fù)制基因包選自由噬菌體顆粒、細(xì)菌、酵母、真菌、微生物孢子和核糖體組成的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其中所述噬菌體顆粒選自由M13噬菌體、T4噬菌體、T7噬菌體、fd噬菌體和λ噬菌體組成的組。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法,其中所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)包括至少一個連接所述肽的氨基酸側(cè)鏈的兩個原子的分子內(nèi)環(huán)鍵。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其中所述原子選自由C、N、O和S組成的組。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法,其中所述環(huán)鍵為C-N、C-O、C-S、N-N、N-O、N-S、O-O或O-S鍵。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法,其中使用適當(dāng)?shù)腜TM酶,所述PTM酶能夠通過在肽的氨基酸側(cè)鏈的兩個原子之間引入分子內(nèi)共價鍵來翻譯加工肽,其中所述原子選自由C、N、O和S組成的組。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法,其中所述PTM酶能夠加工天然核糖體肽。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其中所述天然核糖體肽包括Microviridins、乳鏈球菌素、硫肽(thiopeptides)、芋螺肽、小菌素、溶細(xì)胞素、羊毛硫抗生素、藍(lán)細(xì)菌素(cyanobactins)、鵝膏毒素、毒傘七肽類(phallotoxins)、環(huán)肽和細(xì)菌素中的任意種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法,其中所述PTM酶選自由羧酸酯-胺連接酶、環(huán)化酶、脫氫酶、脫羧酶、差向異構(gòu)酶、羥化酶、肽酶、脫水酶、轉(zhuǎn)移酶、酯酶、氧合酶和異構(gòu)酶組成的組。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法得到可復(fù)制基因包庫,其中所述可復(fù)制基因包展示各種肽序列。
12.翻譯后修飾展示各種肽的可復(fù)制基因包的初級庫的方法,通過采用PTM酶進(jìn)行酶促加工,得到展示各種含有分子內(nèi)環(huán)狀結(jié)構(gòu)的肽的可復(fù)制基因包的成熟庫。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法,其中使用適當(dāng)?shù)腜TM酶,所述PTM酶能夠通過在肽的氨基酸側(cè)鏈的兩個原子之間引入分子內(nèi)共價鍵來翻譯加工肽,其中所述原子選自由C、N、O和S組成的組。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法,其中所述PTM酶能夠加工天然核糖體肽。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法,所述天然核糖體肽包括Microviridins、乳鏈球菌素、硫肽(thiopeptides)、芋螺肽、小菌素、溶細(xì)胞素、羊毛硫抗生素、藍(lán)細(xì)菌素(cyanobactins)、鵝膏毒素、毒傘七肽類(phallotoxins)、環(huán)肽和細(xì)菌素中的任意種。
16.根據(jù)權(quán)利要求12-15中任一項所述的方法,其中所述PTM酶選自由以下酶組成的組:羧酸酯-胺連接酶、環(huán)化酶、脫氫酶、環(huán)化脫水酶、脫羧酶、差向異構(gòu)酶、羥化酶、肽酶、脫水酶、轉(zhuǎn)移酶、酯酶、氧合酶、異構(gòu)酶,尤其是羊毛硫氨酸鍵形成酶、溶細(xì)胞素形成酶、藍(lán)細(xì)菌素(cyanobactin)形成酶、硫肽形成酶、芋螺肽形成酶、Microviridin(microviridin)形成酶、環(huán)肽形成酶、細(xì)菌素形成酶和枯草菌素(subtilosin)形成酶。
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