[發(fā)明專利]修飾肽的展示

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611109795.5
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN107058285A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: G·克里斯蒂安森
• 申請（專利權(quán)）人: 米蒂生物系統(tǒng)有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C40B50/06
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44205
• 代理人: 江側(cè)燕

1.建立展示肽的可復(fù)制基因包庫的方法，所述肽在氨基酸側(cè)鏈內(nèi)具有至少一個分子內(nèi)環(huán)鍵，所述方法包括

a)提供編碼肽變體的核酸序列集；

b)將所述核酸序列集連接到可復(fù)制基因包的基因內(nèi)；

c)在所述可復(fù)制基因包表面上展示對應(yīng)的初級肽序列，得到初級庫；及

d)采用PTM酶對所述初級庫進(jìn)行酶促加工，得到展示所述肽變體環(huán)狀結(jié)構(gòu)的成熟庫。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述可復(fù)制基因包選自由噬菌體顆粒、細(xì)菌、酵母、真菌、微生物孢子和核糖體組成的組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述噬菌體顆粒選自由M13噬菌體、T4噬菌體、T7噬菌體、fd噬菌體和λ噬菌體組成的組。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)包括至少一個連接所述肽的氨基酸側(cè)鏈的兩個原子的分子內(nèi)環(huán)鍵。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述原子選自由C、N、O和S組成的組。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中所述環(huán)鍵為C-N、C-O、C-S、N-N、N-O、N-S、O-O或O-S鍵。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中使用適當(dāng)?shù)腜TM酶，所述PTM酶能夠通過在肽的氨基酸側(cè)鏈的兩個原子之間引入分子內(nèi)共價鍵來翻譯加工肽，其中所述原子選自由C、N、O和S組成的組。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述PTM酶能夠加工天然核糖體肽。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述天然核糖體肽包括Microviridins、乳鏈球菌素、硫肽(thiopeptides)、芋螺肽、小菌素、溶細(xì)胞素、羊毛硫抗生素、藍(lán)細(xì)菌素(cyanobactins)、鵝膏毒素、毒傘七肽類(phallotoxins)、環(huán)肽和細(xì)菌素中的任意種。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述PTM酶選自由羧酸酯-胺連接酶、環(huán)化酶、脫氫酶、脫羧酶、差向異構(gòu)酶、羥化酶、肽酶、脫水酶、轉(zhuǎn)移酶、酯酶、氧合酶和異構(gòu)酶組成的組。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法得到可復(fù)制基因包庫，其中所述可復(fù)制基因包展示各種肽序列。

12.翻譯后修飾展示各種肽的可復(fù)制基因包的初級庫的方法，通過采用PTM酶進(jìn)行酶促加工，得到展示各種含有分子內(nèi)環(huán)狀結(jié)構(gòu)的肽的可復(fù)制基因包的成熟庫。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中使用適當(dāng)?shù)腜TM酶，所述PTM酶能夠通過在肽的氨基酸側(cè)鏈的兩個原子之間引入分子內(nèi)共價鍵來翻譯加工肽，其中所述原子選自由C、N、O和S組成的組。

14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法，其中所述PTM酶能夠加工天然核糖體肽。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，所述天然核糖體肽包括Microviridins、乳鏈球菌素、硫肽(thiopeptides)、芋螺肽、小菌素、溶細(xì)胞素、羊毛硫抗生素、藍(lán)細(xì)菌素(cyanobactins)、鵝膏毒素、毒傘七肽類(phallotoxins)、環(huán)肽和細(xì)菌素中的任意種。

16.根據(jù)權(quán)利要求12-15中任一項所述的方法，其中所述PTM酶選自由以下酶組成的組：羧酸酯-胺連接酶、環(huán)化酶、脫氫酶、環(huán)化脫水酶、脫羧酶、差向異構(gòu)酶、羥化酶、肽酶、脫水酶、轉(zhuǎn)移酶、酯酶、氧合酶、異構(gòu)酶，尤其是羊毛硫氨酸鍵形成酶、溶細(xì)胞素形成酶、藍(lán)細(xì)菌素(cyanobactin)形成酶、硫肽形成酶、芋螺肽形成酶、Microviridin(microviridin)形成酶、環(huán)肽形成酶、細(xì)菌素形成酶和枯草菌素(subtilosin)形成酶。