[發明專利]一種青蒿琥酯的新應用

在審

• 申請號: 201611106935.3
• 申請日: 2016-12-06
• 公開（公告）號: CN106727586A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 馬虎;周建國;張鈺;柏玉舉;呂水萍;劉大海;岳國軍;石磊;張廷友;沈剛
• 申請（專利權）人: 遵義醫學院附屬醫院
• 主分類號: A61K31/517
• 分類號: A61K31/517;A61K31/357;A61P35/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所52100
• 代理人: 劉楠,李龍

技術領域

本發明涉及一種逆轉肺腺癌厄洛替尼耐藥，屬于肺癌治療領域。

背景技術

肺癌是導致癌癥相關性死亡主要的原因，分子靶向治療的出現為肺癌的治療帶來了新的希望，其有明確的作用位點，而且不良反應小，療效確切。分子靶向藥物的缺點是其價格昂貴、不能完全清除病灶，并且最終會產生耐藥，這一點限制了其在臨床上的應用。。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種青蒿琥酯的新應用，以解決現有分子靶向藥物最終會產生耐藥，限制其在臨床上應用的問題。

為解決上述問題，擬采用這樣一種青蒿琥酯的新應用，青蒿琥酯用于逆轉肺腺癌厄洛替尼耐藥，進一步地，青蒿琥酯和厄洛替尼聯合用藥。

青蒿琥酯用于肺腺癌厄洛替尼耐藥的逆轉研究方法：

ART對人肺腺癌PC9細胞的體外抗瘤活性研究：培養PC9細胞株，加入不同濃度的ART，用cell Counting Kit-8(cck-8)檢測PC9細胞的增殖率，Real-time RT-PCR和western-blot檢測EGFR、IGF1R、AXL和Akt mRNA、蛋白及凋亡相關蛋白的表達；

厄洛替尼繼發性耐藥細胞系的培養及耐藥性的檢測：用cck-8法檢測PC9/ER的增殖率，計算耐藥倍數，Real-time RT-PCR和western-blot檢測EGFR、IGF1R、AXL、Akt mRNA和蛋白的表達；

體外實驗驗證ART逆轉肺腺癌ER耐藥的作用及機制：在PC9/ER細胞株中加入不同濃度的ART、ER或聯合用藥，并以LY294002為陽性對照，用cck-8法測增殖率，Real-time RT-PCR和western-blot檢測EGFR、IGF1R、AXL和Akt m RNA和蛋白的表達；

通過裸鼠移植瘤體內實驗驗證ART逆轉肺腺癌ER耐藥的作用及機制，厄洛替尼繼發性耐藥細胞系簡稱PC9/ER，厄洛替尼簡稱ER，青蒿琥酯簡稱ART。

與現有技術相比，本發明所述青蒿琥酯能夠有效逆轉肺腺癌厄洛替尼耐藥，配合厄洛替尼后能夠有效地改善肺癌預后，很好地解決了分子靶向藥物會產生耐藥的問題，進一步推進分子靶向藥物在臨床上的應用。

附圖說明

圖1光學顯微鏡下不同濃度青蒿琥酯處理PC9細胞后細胞數量及形態學的變化(x200)，其中：

A：0.1％DMSO對照組；B：青蒿琥酯25μmol/L組

C：青蒿琥酯50mol/L組；D：青蒿琥酯100mol/L組；

圖2青蒿琥酯對PC9細胞的增殖抑制作用；

圖3青蒿琥酯處理48h后細胞中EGFR、IGF1R、AXL和Akt mRNA的相對表達，注：*p<0.05vs control**p<0.01vs control；

圖4青蒿琥酯處理48h后PC9細胞中EGFR、IGF1R、AXL和Akt及其磷酸化的表達水平；

圖5青蒿琥酯處理48h后PC9細胞中凋亡相關蛋白的表達水平；

圖6青蒿琥酯對PC9細胞和PC9/ER細胞的增殖抑制作用；

圖7不同實驗組作用于PC9/ER細胞后IGF1R和AXL的蛋白表達及磷酸化水平變化情況；

圖8不同實驗組作用于PC9/ER細胞后Akt的蛋白表達及磷酸化水平變化情況；

圖9不同實驗組作用于PC9/ER細胞后凋亡相關蛋白的表達及磷酸化水平變化情況；

圖10不同實驗組裸鼠體重變化情況；

圖11不同實驗組裸鼠瘤體體積變化情況，注：*p<0.05vs Con組n＝5。

具體實施方式

為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對發明作進一步地詳細描述。

實驗例1：

青蒿琥酯對人肺腺癌PC9細胞的體外抗瘤活性研究

1材料與方法

1.1主要實驗材料

1.1.1細胞株

人肺腺癌PC9細胞由第三軍醫大學新橋醫院全軍腫瘤研究所陳正堂教授惠贈。

1.1.2主要試劑

1.1.3主要材料設備

1.2實驗方法

1.2.1細胞的復蘇、培養、傳代與凍存

腫瘤細胞的復蘇與培養