[發(fā)明專利]一種封閉IL6R的用于緩解CRS的CAR-T轉(zhuǎn)基因載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611103319.2
• 申請日: 2016-12-05
• 公開（公告）號: CN108148863B
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 祁偉;俞磊;康立清;余宙
• 申請（專利權(quán)）人: 上海優(yōu)卡迪生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/66;A61K48/00;A61K39/00;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 31325 上海市匯業(yè)律師事務(wù)所
• 代理人: 王函

1.一種封閉IL6R的用于緩解細胞因子釋放綜合癥的CAR-T轉(zhuǎn)基因載體，其特征在于，包括：

用于目的菌株大量擴增的含氨芐青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；

用于質(zhì)粒復(fù)制的原核復(fù)制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；

用于增強真核細胞內(nèi)的復(fù)制的病毒復(fù)制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；

用于增強轉(zhuǎn)基因的表達效率的eWPRE增強型土撥鼠乙肝病毒轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件，如SEQID NO.11所示；

用于嵌合抗原受體基因的真核轉(zhuǎn)錄的人EF1α啟動子，如SEQ ID NO.12所示；

用于慢病毒包裝的慢病毒包裝順式元件；

編碼人IL6R的人源化單鏈抗體的核苷酸序列，所述人IL6R的人源化單鏈抗體為如SEQID NO.21所示的IL6RscFv1，或者如SEQ ID NO.22所示的IL6RscFv2，或者如SEQ ID NO.23所示的IL6RscFv3；

用于共同轉(zhuǎn)錄表達蛋白質(zhì)的IRES核糖體結(jié)合序列，如SEQ ID NO.25所示；

編碼IL6信號肽的核苷酸序列，如SEQ ID NO.26所示；

編碼人源抗體Fc段的核苷酸序列，如SEQ ID NO.27所示；

以及編碼用于組成集識別、傳遞、啟動于一體的二代CAR或三代CAR的嵌合抗原受體的核苷酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的載體，其特征在于，所述編碼人IL6R的人源化單鏈抗體的核苷酸序列為如SEQ ID NO.21所示的IL6RscFv1。

3.如權(quán)利要求1所述的載體，其特征在于，所述慢病毒包裝順式元件采用第二代慢病毒載體包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag順式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE順式元件、如SEQ ID NO.9所示的env順式元件、以及如SEQ ID NO.10所示的cPPT順式元件。

4.如權(quán)利要求1所述的載體，其特征在于，所述慢病毒包裝順式元件采用第三代慢病毒載體包括：如SEQ ID NO.5所示的慢病毒5 terminal LTR、如SEQ ID NO.6所示的慢病毒3terminal Self-Inactivating LTR、如SEQ ID NO.7所示的Gag順式元件、如SEQ ID NO.8所示的RRE順式元件、如SEQ ID NO.9所示的env順式元件、如SEQ ID NO.10所示的cPPT順式元件，以及如SEQ ID NO.4所示的RSV啟動子。