[發明專利]一種生物素標記探針聯合蛋白芯片尋找小分子化學藥靶點的方法

在審

• 申請號: 201611086740.7
• 申請日: 2016-11-28
• 公開（公告）號: CN108120810A
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 祝健
• 申請（專利權）人: 寧波源溯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明將生物素與小分子化學藥進行連接，形成一種“生物素一小分子化學藥”標記探針，然后將這種標記探針直接與蛋白芯片共孵育，經過洗滌后，根據檢測蛋白芯片上的生物素標記探針和BODIPY?FL鏈霉親合素結合來確定藥物與芯片上固定的蛋白質之問特異性的結合位點(即靶點)，進而通過計算機軟件分析這些結合位點的蛋白。本發明可簡便、快速地尋找小分子化學藥以及對細胞產生藥效的靶蛋白，可為高通量地篩選小分子化學藥新藥提供高效的技術手段。

技術領域

本發明提供了一種生物素標記技術結合蛋白芯片技術尋找小分子化學藥作用靶點的方法，屬于材料、化學合成、化工、藥學和生物的交叉領域，具體涉及一種通過生物納米技術和蛋白芯片技術相結合尋找小分子化學藥作用靶點的方法，尤其是通過生物素標記粒子在蛋白芯片上尋找小分子化學藥作用的靶蛋白的方法。

背景技術

多年來人們研究表明，大多數藥物是通過干涉細胞中的酶或受體的功能來實現其要藥效的，酶或受體都是蛋白質，在它們的表面有很多可被小分子占住的空位，當小分子如同鎖的鑰匙一樣結合在酶或受體上的空位時，這些小分子即稱配體。當一種藥物與配體具有相同或相似的形狀，則這種藥物便可以結合到酶或受體上，結合藥物酶或受體將向細胞發送一個信號，使細胞發生一系列的生理反應。結合藥物的酶或受體即為藥物作用的直接靶點(靶蛋白)。當藥物能結合的靶點是多個時，這種藥物可能就有副作用。

蛋白芯片具有高通量分析的特點，在揭示藥物作用的分子機理方面可顯示巨大的優越性。蛋白質芯片是將蛋白質高密度地固定在芯片上，這些蛋白質可高度特異性地與靶分子結合。當藥物直接與芯片上的蛋白質發生作用，即可達到高通量而且快速地分析藥物作用的靶點，這是分析藥物作用靶點最直接的方法。對于小分子化學藥體系，可以在芯片上固定多達17,000個人體蛋白，然后與小分子化學藥進行孵育，從而初步確定小分子化學藥作用靶點。但利用生物芯片研究藥物作用機制時，當前使用較多的是基因芯片，如國內與人采用小鼠8192點基因芯片研究了中藥復方對MRL/pr狼瘡小鼠腎臟基團表達及Th1/TH2細胞因子比列的調節作用，實驗采用有機熒光染料Cy3和Cy5來檢測雜交結果。實驗表明，這種采用基因芯片研究藥物作用機制的方法在國內外均有較多的文獻報道，但這種方法不能明確藥物直接作用的受體。

雖然蛋白質芯片就是已比較成功地用于高通量的藥物篩選(我國蛋白質芯片就是成功應用于高通量藥物篩選.)但未見有將生物素標記技術結合蛋白質芯片技術來尋找小分子化學藥靶點的實驗報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種尋找小分子化學藥有作用靶點的簡便方法。本發明公開了上訴尋找小分子化學藥作用靶點的方法，尤其是公開生物素與小分子化學藥連接以形成一種“生物素-小分子化學藥”生物素標記探針，并將這種探針用于蛋白芯片以尋找藥物作用靶點的方法。

本發明是通過以下就是方案實現的：本發明將生物素標記粒子與小分子化學藥進行連接，形成一種“生物素-小分子化學藥”熒光探針，然后將這種熒光探針直接與蛋白芯片共孵育，經過BODIPY-FL鏈霉親合素洗滌后，根據檢測蛋白芯片上的生物素標記探針和BODIPY-FL鏈霉親合素結合而確定藥物與芯片上固定的已知蛋白之間特異性的結合位點，進而通過計算機軟件分析這些結合位點的的蛋白。

以下對本發明的制備方法和應用進一步說明，具體如下：

本發明通過共價鍵、配位鍵、氫鍵、靜電吸附中的任意一種或任意幾種的組合作用將生物素與小分子化學藥進行連接。獲得的產物通過分離純化以除去游離的雜質成分，然后將獲得的探針與蛋白芯片進行孵育。