[發明專利]農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化系統有效
| 申請號： | 201611064062.4 | 申請日： | 2016-11-28 |
| 公開（公告）號： | CN106755063B | 公開（公告）日： | 2020-05-19 |
| 發明（設計）人： | 趙忠娟;魏艷麗;李紀順;楊合同;王貽蓮 | 申請（專利權）人： | 山東省科學院生態研究所 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 濟南舜源專利事務所有限公司 37205 | 代理人： | 于曉曉 |
| 地址： | 250014*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 桿菌 耐鹽椒樣 薄荷 轉化 系統 | ||
1.農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，步驟包括：
(1)耐鹽椒樣薄荷莖段預培養；
(2)農桿菌介導的外源基因轉化；
(3)共培養；
(4)叢生芽再生與抗生素篩選；
(5)生根誘導和陽性植株檢測；
其中，步驟(2)中轉化液為0.2MS+0.5g/L 2-(N-嗎啡啉)乙磺酸+30mg/L乙酰丁香酮+1％葡萄糖+2％蔗糖，pH 5.4。
2.根據權利要求1所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，步驟(1)所用耐鹽椒樣薄荷莖段為含腋芽莖段，并用無菌刀片在腋芽處輕輕劃幾刀，使其具有損傷易于轉化和叢生芽分化，然后將莖段放入預培養的培養基中黑暗條件下預培養3天。
3.根據權利要求2所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，預培養所用培養基為：MS+3.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH 5.8。
4.根據權利要求1所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，步驟(2)農桿菌介導的外源基因轉化的方法是：將預培養的耐鹽椒樣薄荷莖段置于用轉化液重懸的農桿菌菌液中，菌液調整OD600為0.6-0.8，抽真空10-15min，然后黑暗條件下30℃，200r/min震蕩培養30min。
5.根據權利要求1所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，步驟(3)的方法為：抽真空轉化的耐鹽椒樣薄荷莖段置于共培養培養基上，25±3℃暗培養3-4d。
6.根據權利要求5所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，共培養培養基為：MS+30mg/L乙酰丁香酮+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH 5.8。
7.根據權利要求1所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，步驟(4)叢生芽再生與抗生素篩選的方法為：共培養的耐鹽椒樣薄荷莖段用無菌水清洗后，轉至添加頭孢和篩選標記抗生素的叢生芽誘導培養基上誘導叢生芽再生。
8.根據權利要求7所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，叢生芽再生和篩選和培養基為：MS+3mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+0.2mg/L萘乙酸+200mg/L頭孢+抗生素+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH 5.8。
9.根據權利要求1所述的農桿菌介導的耐鹽椒樣薄荷莖段轉化方法，其特征在于，步驟(5)所述生根誘導和陽性植株檢測中，生根誘導培養基為：1/2MS+0.2mg/L萘乙酸+10g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH 5.8，陽性植株檢測為利用基因組DNA進行PCR檢測。
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