[發明專利]一種桃葉衛矛花粉超低溫保存和再生的生產方法

有效

• 申請號: 201611032560.0
• 申請日: 2016-11-23
• 公開（公告）號: CN106689121B
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發明（設計）人: 宋紅;李享;李萬義;李萍
• 申請（專利權）人: 東北林業大學
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種桃葉衛矛花粉超低溫保存和再生的生產方法，屬于一種園林生產、種質資源保護領域。

背景技術

桃葉衛矛，又名白杜、絲綿木，是衛矛科衛矛屬的一種小喬木，是我國常見的觀賞類庭園樹種之一，其葉形秀麗，植株繁茂，包被有紅色假種皮的果實可長期宿存于枝頭，到了冬季，白雪紅果相映，十分美麗，為冬季的北方園林增添了不少色彩。桃葉衛矛在耐寒、抗旱、抗風等方面具有良好的適應性；桃葉衛矛果實總皂苷對人肝癌細胞系-SMMC、人宮頸癌細胞系-HeLa和乳腺癌細胞系-MCF7有明顯的抑制生長作用；桃葉衛矛的種子含豐富的脂肪類物質，含油率高達40％以上，可用做工業用油；木材細膩堅韌，可用于雕刻、制帆桿或滑車等；種子及根藥用，可用于治療膝關節痛、漆瘡等疾病。由此可見，桃葉衛矛是一種集工業、藥用、觀賞應用于一體的植物，具有較高的推廣價值。若采用傳統的種植保存，極易使其受到病菌或蟲害的影響，進而造成極大的人力財力的損失,成熟的花粉含有植物的全部遺傳品質信息，花粉超低溫保存操作簡單，是進行種質資源保存的一條新途徑，是目前唯一可行的長期而穩定地保存種質資源的方法。

植物種質資源超低溫保存是指將植物細胞、組織或器官在液氮(-196℃)的超低溫條件下進行保存。在如此低的溫度下，植物材料中參與新陳代謝的各種生物酶的活性受到極大抑制，生物體新陳代謝基本停止，處于“假死”狀態，利用該方法可以實現植物種質資源的永久保存。目前成功進行超低溫保存的材料類型有種子、休眠芽、莖尖分生組織、花粉、合子胚(胚軸)、體細胞胚、懸浮細胞、愈傷組織、原生質體等。其中花粉超低溫保存操作簡單，可保持特定的基因型。

將超低溫保存技術應用于花粉保存，其優點：操作簡單易行、占用空間小、安全穩定保存成本低可以大大延長花粉的保存時間，使花粉的貯運和交換成為可能，同時還能很好服務于育種工作，提高育種效率經過低溫保存的花粉能保持其遺傳完整性和穩定性低溫條件下還可以避免病蟲害的引入，為地區間、國際間的種質交換提供方便。

一種桃葉衛矛花粉超低溫保存和再生的生產方法，目前還未見報道。因此，發明桃葉衛矛花粉超低溫保存和再生的生產方法是非常必要的。

發明內容

本發明的目的是通過以下技術方案來實現：

將不同時間采集的桃葉衛矛新鮮花粉放入1.8ml的凍存管中，花粉的體積不超過凍存管容量的2/3，然后將冷凍管放入盛有硅膠干燥劑的干燥皿內干燥不同的時間后獲得不同含水量的花粉，干燥皿規格為V＝410mm×410mm×310mm、Φ＝300mm；將裝有花粉的凍存管投入﹣196℃液氮罐中保存；取出凍存管進行不同化凍處理；化凍后將花粉在不同濃度的蔗糖和硼酸培養液中測定萌發率。

所述不同采集時間，1d中不同時間所采集的花粉萌發率不同，我們分別采集了6:00、8:00、10:00、12:00、14:00、16:00、18:00的桃葉衛矛花粉。

所述干燥不同的時間分別為干燥2h、4h、6h、8h、10h、12h。

所述不同含水量，為桃葉衛矛花粉干燥的時間不同，得到的含水量。

所述不同化凍方式，分別為三種：(1)室溫化凍30min；(2)40℃水浴化凍2min；(3)自來水沖洗8min。

所述不同蔗糖和硼酸濃度，以桃葉衛矛花粉為材料，去離子水作為溶劑，加入不同濃度的蔗糖和硼酸，采用二因素完全隨機的方法，共設計了16種不同培養基。分別為：蔗糖50g/L+硼酸0mg/L；蔗糖50g/L+硼酸100mg/L；蔗糖50g/L+硼酸150mg/L；蔗糖50g/L+硼酸200mg/L；蔗糖100g/L+硼酸0mg/L；蔗糖100g/L+硼酸100mg/L；蔗糖100g/L+硼酸150mg/L；蔗糖100g/L+硼酸200mg/L；蔗糖150g/L+硼酸0mg/L；蔗糖150g/L+硼酸100mg/L；蔗糖150g/L+硼酸150mg/L；蔗糖150g/L+硼酸200mg/L；蔗糖200g/L+硼酸0mg/L；蔗糖200g/L+硼酸100mg/L；蔗糖200g/L+硼酸150mg/L；蔗糖200g/L+硼酸200mg/L。

通過對以上技術方案進行實驗找出最佳的一種桃葉衛矛花粉超低溫保存和再生的生產方法，用于權利要求。

具體實施方式：

以下對本發明結合具體的實例作進一步的詳細說明，并介紹本發明的相關研究結果。

1.以東北林業大學校內的桃葉衛矛花粉為例對本發明作進一步的詳細說明。