[發明專利]一種血漿或血清游離DNA和RNA的硅膠吸附柱提取試劑盒及方法在審
| 申請號： | 201611030469.5 | 申請日： | 2016-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN108070584A | 公開（公告）日： | 2018-05-25 |
| 發明（設計）人： | 黃鈞昱 | 申請（專利權）人： | 江蘇然科生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京元本知識產權代理事務所 11308 | 代理人： | 秦力軍 |
| 地址： | 214061 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 游離DNA 硅膠吸附柱 試劑盒 血清 血漿 提取試劑盒 促進劑 吸附液 洗滌液 分子生物領域 變性蛋白質 核酸分離 核酸吸附 溶解狀態 無水乙醇 蛋白酶K 高純度 裂解液 三蒸水 異丙醇 吸附 洗滌 釋放 | ||
1.一種血漿或血清游離DNA和RNA的硅膠吸附柱提取試劑盒，包括蛋白酶K、異丙醇、無水乙醇、三蒸水，其特征在于，還包括：
含有核酸分離促進劑的裂解液，用于促進血漿或血清中游離DNA和RNA與結合蛋白的分離；
含有核酸吸附促進劑的吸附液，用于促進硅膠吸附柱對游離DNA和RNA的吸附，同時保持變性蛋白處于溶解狀態；以及洗滌液；
其中，洗滌液包括：
用于除去硅膠膜上非特異性結合蛋白的洗滌液I；
用于除去硅膠膜上殘留的胍、氯化鈉等鹽離子的洗滌液II。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述裂解液中的核酸分離促進劑是十二烷基硫酸三乙醇胺和二甲亞砜。
3.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述裂解液還包括：Tris-HCl，異硫氰酸胍，氯化鈉，EDTA成分。
4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述吸附液中的核酸吸附促進劑為TritonX-100和硫脲。
5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述吸附液還具有：磷酸鹽緩沖液，異硫氰酸胍和氯化鈉。
6.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述洗滌液I是由Tris-HCl，鹽酸胍，氯化鈉和乙醇組成。
7.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述洗滌液II是由Tris-HCl，乙醇組成。
8.一種血漿或血清游離DNA和RNA的硅膠吸附柱提取方法，其特征在于，其利用權利要求1所述的試劑盒對游離DNA和RNA進行硅膠吸附柱提取。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用權利要求1所述的試劑盒對游離DNA和RNA進行硅膠吸附柱提取包括：
向血漿或血清樣本中加入具有核酸分離促進劑的裂解液和蛋白酶K進行混勻及孵育處理，使血漿或血清中的游離DNA和RNA與結合蛋白分離，得到混合物；
向混合物中加入具有核酸吸附促進劑的吸附液，并加入異丙醇進行混勻，冰浴后轉入硅膠吸附柱進行負壓抽濾，使混合物中游離DNA和RNA高效地吸附在硅膠吸附柱上；
抽濾完成后，先使用無水乙醇對硅膠吸附柱進行兩次洗滌，再依次使用洗滌液I、洗滌液II、無水乙醇對硅膠吸附柱分別進行一次洗滌，第一離心處理后，進行烘干，得到去除雜質的含有游離DNA和RNA的硅膠吸附柱；
利用三蒸水對硅膠吸附柱進行洗脫，第二離心處理后收集洗脫液，得到游離DNA和RNA。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述裂解液中的核酸分離促進劑是十二烷基硫酸三乙醇胺和二甲亞砜，所述吸附液中的核酸吸附促進劑為TritonX-100和硫脲，所述洗滌液I是由Tris-HCl，鹽酸胍，氯化鈉和乙醇組成，所述洗滌液II是由Tris-HCl，乙醇組成。
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