[發明專利]基于切片式去細胞支架構建的人工神經移植物及制備方法

有效

• 申請號: 201611027732.5
• 申請日: 2016-11-22
• 公開（公告）號: CN106730034B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 陳謙;胡萍萍;陳平波;龔愛華;張志堅
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;A61L27/54;A61L27/52;A61L27/50;A61L27/36;A61L27/38;A61L27/22
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1.一種組織工程神經移植物，其特征在于，所述神經移植物基于切片式去細胞支架構建而成；所述神經移植物由切片式去細胞支架和京尼平交聯細胞因子，負載自體干細胞構建而成；所述自體干細胞是在體外培養純化，并進行擴增鑒定的外胚間充質干細胞。

2.一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，按照如下步驟進行：以固定液固定組織，冰凍切片后進行去細胞處理，以京尼平交聯細胞因子，制備京尼平交聯支架上；培養患者自體外胚間充質干細胞，在體外培養純化并進行擴增鑒定，隨后將鑒定后的外胚間充質干細胞種植于所述京尼平交聯的支架上，以纖維蛋白原和凝血酶粘合載細胞切片支架構建神經移植物。

3.根據權利要求 2 所述的一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，所述組織來源為哺乳動物的脊髓、骨骼肌或肌腱；所述固定液為 4%多聚甲醛；所述冰凍切片要求為縱向切片，切片厚度為 600μm。

4.根據權利要求 2 所述的一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，所述去細胞處理具體操作為：用 3%（wt.%）Triton X-100、1M 氫氧化鈉、10%（wt.%）十二烷基磺酸鈉及4%（wt.%）脫氧膽酸鈉依次浸泡去除切片內細胞成分。

5.根據權利要求 2 所述的一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，所述京尼平交聯細胞因子的具體操作為：去細胞處理后得到的去細胞支架按體積比1：20浸泡于DMEM/F-12培養液中，培養液中預混表皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、神經營養因子及神經營養素 3，隨后加入預滅菌的磷酸緩沖液配制的京尼平溶液，于細胞培養箱內 37℃培養 12h，出現呈色反應，溶液呈深藍色，切片從白色變為藍色。

6.根據權利要求 2 所述的一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，所述患者自體外胚間充質干細胞來源于鼻腔呼吸部粘膜細胞。

7.根據權利要求 2 所述的一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，所述纖維蛋白原濃度 8-10 mg/mL；所述凝血酶濃度 50-100 IU/mL。

8.根據權利要求 2 所述的一種組織工程神經移植物的制備方法，其特征在于，以纖維蛋白原和凝血酶粘合載細胞切片支架構建神經移植物的具體操作為：制備出含截面為弧形凹槽的載體；將載細胞切片支架層疊在弧形凹槽內，或者卷曲后置于槽內，加入纖維蛋白原與凝血酶，構建人工神經移植物。