[發(fā)明專利]一種生產(chǎn)氨基葡萄糖的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611001491.7
• 申請日: 2016-11-14
• 公開（公告）號: CN108070628B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡美榮;王雷;陶勇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;何葉喧

本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)氨基葡萄糖的方法。本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)氨基葡萄糖的方法，包括如下步驟：以N?乙酰氨基葡萄糖為原料，在工程菌的作用下，生產(chǎn)氨基葡萄糖；所述工程菌為表達(dá)功能蛋白的重組菌，是將編碼所述功能蛋白的功能基因?qū)氤霭l(fā)菌得到的；所述功能蛋白為N?乙酰?6?磷酸氨基葡萄糖脫乙酰酶或幾丁二糖脫乙酰酶。采用本發(fā)明提供的方法制備氨基葡萄糖，反應(yīng)條件溫和、工藝路線簡單、產(chǎn)物純度高、適合大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，非常適于推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種生產(chǎn)氨基葡萄糖的方法。

背景技術(shù)

氨基葡萄糖，又叫葡萄糖胺(Glucosamine，GlcN)，簡稱氨糖，廣泛存在于動物外骨骼及微生物細(xì)胞壁中。氨基葡萄糖廣泛應(yīng)用于食品、保健、化妝品、醫(yī)藥等行業(yè)。氨基葡萄糖是形成軟骨組織細(xì)胞的重要營養(yǎng)素，是健康關(guān)節(jié)軟骨組織的天然組成成分，可以幫助修復(fù)和維護(hù)軟骨組織，并能刺激軟骨組織細(xì)胞的生長與發(fā)育。

目前，氨基葡萄糖的生產(chǎn)方法主要是甲殼素水解法。甲殼素水解法是酸解蝦蟹殼中的甲殼素生產(chǎn)氨基葡萄糖，此方法造成了海洋資源的過渡捕撈，而且加工處理工藝產(chǎn)生的廢液對環(huán)境污染較為嚴(yán)重，相關(guān)研究表明，利用該種方法得到的產(chǎn)品易引起過敏反應(yīng)，不適宜海鮮過敏人群服用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)氨基葡萄糖的方法。

本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)氨基葡萄糖的方法，包括如下步驟：以N-乙酰氨基葡萄糖為原料，在工程菌的作用下，生產(chǎn)氨基葡萄糖；所述工程菌為表達(dá)功能蛋白的重組菌，是將編碼所述功能蛋白的功能基因?qū)氤霭l(fā)菌得到的；所述功能蛋白為N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脫乙酰酶或幾丁二糖脫乙酰酶。

所述N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脫乙酰酶為EcDac蛋白；所述EcDac蛋白為如下(a1)或(a2)：

(a1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(a2)將序列2的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白質(zhì)。

所述N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脫乙酰酶為VcDac蛋白；所述VcDac蛋白為如下(b1)或(b2)：

(b1)由序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(b2)將序列4的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白質(zhì)。

所述N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脫乙酰酶為TmDac蛋白；所述TmDac蛋白為如下(c1)或(c2)：

(c1)由序列表中序列6所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(c2)將序列6的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白質(zhì)。

所述幾丁二糖脫乙酰酶為TKDac蛋白；所述TKDac蛋白為如下(d1)或(d2)：

(d1)由序列表中序列8所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(d2)將序列8的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的其衍生的蛋白質(zhì)。

所述功能基因?yàn)镋cDac基因；所述EcDac基因?yàn)槿缦?e1)或(e2)或(e3)的DNA分子：

(e1)編碼區(qū)如序列表中序列1所示的DNA分子；

(e2)在嚴(yán)格條件下與(e1)限定的DNA序列雜交且編碼EcDac蛋白的DNA分子；