[發(fā)明專利]一種測(cè)定Hg2+濃度的熒光分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610991891.0
• 申請(qǐng)日: 2016-11-11
• 公開（公告）號(hào): CN106706575B
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王永祥;耿鳳華;姜香宇;瞿鵬;徐茂田
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 商丘師范學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 洛陽公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 程茗

1.一種測(cè)定Hg²⁺濃度的熒光分析方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、選取兩條長度不等且均富含T和G兩種堿基的非標(biāo)記單鏈DNA分子A和B，分別配制成溶液A和溶液B，將兩種溶液分別于90℃水浴5 min，冷卻至室溫，備用；所述非標(biāo)記單鏈DNA分子A和B均在分子鏈的一端富T，另一端富G；所述非標(biāo)記單鏈DNA分子A和B中的G堿基數(shù)的比為4:8，非標(biāo)記單鏈DNA分子A和B的匹配長度為7-10個(gè)連續(xù)的T堿基；

步驟二、將所得溶液A、溶液B與硫代黃素溶液進(jìn)行混合，得混合物Ⅰ；將混合液Ⅰ與Tris-HNO₃緩沖液進(jìn)行混合，得混合液Ⅱ；其中混合液Ⅱ中非標(biāo)記單鏈DNA分子A的摩爾濃度為0.5-1.5μmol/L，非標(biāo)記單鏈DNA分子B的摩爾濃度為0.5-1.5μmol/L，硫代黃素的摩爾濃度為2μmol/L；

步驟三、向混合液Ⅱ中加入Hg²⁺，使混合液Ⅱ中Hg²⁺濃度為0.3 - 4μmol/L；將加入Hg²⁺的混合液Ⅱ置于室溫下震蕩30min，然后在450 nm激發(fā)波長下測(cè)定熒光強(qiáng)度值，根據(jù)測(cè)定的熒光強(qiáng)度值計(jì)算Hg²⁺的濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定Hg²⁺濃度的熒光分析方法，其特征在于：所述非標(biāo)記單鏈DNA分子A和B的匹配長度為9個(gè)連續(xù)的T堿基。

3.如權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定Hg²⁺濃度的熒光分析方法，其特征在于：步驟二所述Tris-HNO₃緩沖液中包含20mmol/L的Mg²⁺。

4.如權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定Hg²⁺濃度的熒光分析方法，其特征在于：步驟二所述混合液Ⅰ中非標(biāo)記單鏈DNA分子A和B的摩爾數(shù)相等。

5.如權(quán)利要求1-4任意一種所述的一種測(cè)定Hg²⁺濃度的熒光分析方法，其特征在于：所述步驟二的具體操作步驟為：將10μL摩爾濃度為100μmol/L的溶液A、10μL摩爾濃度為100μmol/L的溶液B 和 10μL 摩爾濃度為200μmol/L的硫代黃素溶液進(jìn)行混合，得混合液Ⅰ；再將混合液Ⅰ溶于 970μL 摩爾濃度為10mmol/L的Tris-HNO₃緩沖液混合均勻，得混合液Ⅱ。