[發明專利]一種基于腫瘤細胞與腫瘤相關成纖維細胞的3D共培養模型

在審

• 申請號: 201610985876.5
• 申請日: 2016-11-09
• 公開（公告）號: CN108060132A
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 黨永軍;楊宸;李增霞;倪曉凌;崔照盟;高強;王嘉琦
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種基于腫瘤細胞與腫瘤相關成纖維細胞的3D共培養模型，其特征在于，基于甲基纖維素的3D細胞共培養方法，采用3D細胞培養基的成分為含有10％的胎牛血清，0.24％的甲基纖維素的DMEM/F12培養基，將細胞消化后，含有2500個細胞的100μL3D細胞培養基加入未經過組織處理的96孔圓底板，細胞即刻開始自發聚集，三天后形成致密的球狀立體結構。

2.按權利要求1所述的基于腫瘤細胞與腫瘤相關成纖維細胞的3D共培養模型，其特征在于，所述的3D細胞培養基的成分為含有10％的胎牛血清，0.24％的甲基纖維素的DMEM/F12培養基。

3.按權利要求1所述的基于腫瘤細胞與腫瘤相關成纖維細胞的3D共培養模型，其特征在于，所述的將細胞消化后，含有2500個細胞的100μL3D細胞培養基加入未經過組織處理的96孔圓底板。

4.基于腫瘤細胞與腫瘤相關成纖維細胞的3D共培養模型的構建方法，其特征在于，其包括，將人胰腺癌細胞系Capan-1用含10％胎牛血清的DMEM培養基置于37℃、5％CO2的培養箱中培養；人原代胰腺星狀細胞用含10％胎牛血清的DMEM/F12培養基置于37℃、5％CO2的培養箱中培養；將Capan-1細胞系用綠色熒光蛋白GFP病毒侵染標記，將胰腺星狀細胞用紅色熒光蛋白RFP標記，分別檢測兩種細胞的侵染效率；取對數生長期的細胞，將含有1250個Capan-1細胞和1250個胰腺星狀細胞的100μL3D細胞培養基加入未組織處理的96孔圓底板；后續進行缺氧微環境的檢測，兩種細胞共培養的熒光狀態。

5.按權利要求4所述的的構建方法，其特征在于，將篩選的一種對腫瘤細胞和腫瘤相關成纖維細胞均有增殖抑制效果的藥物，以及一種選擇性抑制腫瘤細胞的藥物以及一種選擇性抑制腫瘤相關成纖維細胞的藥物，將其加入3D共培養體系內，應用于藥物研究。