[發明專利]一種高表達外源蛋白穩定細胞株的篩選方法在審
| 申請號： | 201610928023.8 | 申請日： | 2016-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN108018302A | 公開（公告）日： | 2018-05-11 |
| 發明（設計）人： | 應勖;倪寶富;柯蓓蕾;趙奕婷 | 申請（專利權）人： | 三生國健藥業（上海）股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/67 | 分類號： | C12N15/67 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201203 上海市浦*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 蛋白 穩定 細胞株 篩選 方法 | ||
1.一種高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：
(a)使用細胞周期調節劑處理細胞；
(b)將包含外源蛋白表達基因的重組質粒導入(a)經所述細胞周期調節劑處理的細胞中；
(c)篩選高表達外源蛋白的穩定細胞株。
2.如權利要求1所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述細胞周期調節劑使所述細胞處于G2/M期。
3.如權利要求2所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述細胞周期調節劑為阿非迪霉素、MDK抑制劑，優選的，所述細胞周期調節劑為阿非迪霉素。
4.如權利要求3所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述阿非迪霉素的作用濃度為0-2μg/ml(不包含0μg/ml和2μg/ml)，優選的，所述阿非迪霉素的作用濃度為0.5-1μg/ml。
5.如權利要求3所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述阿非迪霉素的作用時間為4-24小時，優選的，所述阿非迪霉素的作用時間為8小時。
6.如權利要求1所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述細胞為哺乳動物細胞。
7.如權利要求6所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞為CHO細胞、293細胞，優選的，所述哺乳動物細胞為CHO細胞，更優選的，所述CHO細胞為CHO-S或DG44。
8.如權利要求1所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述外源蛋白為抗體、融合蛋白、細胞因子，優選的，所述外源蛋白為抗體。
9.如權利要求8所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述抗體為抗GPNMB抗體。
10.如權利要求1所述的高表達外源蛋白的穩定細胞株的篩選方法，其特征在于，所述導入的方法為電穿孔轉染法或PEI轉染法。
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