[發明專利]長鏈非編碼RNA LINC00673原位雜交探針的應用方法

有效

• 申請號: 201610926504.5
• 申請日: 2016-10-31
• 公開（公告）號: CN106636339B
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發明（設計）人: 郭燦;曾朝陽;熊煒;李桂源;喻建軍;劉彥;李小玲;龔朝建;張姍姍;張文玲;馬健;彭淑平
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所 43114
• 代理人: 袁靖

本發明公開了一種長鏈非編碼RNA(LncRNA)LINC00673原位雜交探針的應用方法，即用于制備口腔腫瘤患者的預后制劑，特別是制備出原位雜交檢測法預測口腔腫瘤患者預后的試劑盒。通過研究證實LncRNA LINC00673在口腔腫瘤組織中表達上調，高表達LncRNA LINC00673的口腔腫瘤患者比低表達LncRNA LINC00673的口腔腫瘤患者預后差，因此，將LncRNA LINC00673的表達用于口腔腫瘤患者的預后預測，可以為口腔腫瘤患者的預后提供強有力的分子生物學依據，具有深遠的臨床意義和重要的推廣應用前景。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，具體涉及長鏈非編碼RNA LINC00673的原位雜交探針的應用方法。

背景技術

口腔頜面部惡性腫瘤是常見高發的頭頸部惡性腫瘤，容易發生頸部淋巴結轉移，預后較差。研究表明，這種腫瘤的發生發展是多基因參與、多步驟、多階段的復雜過程，其中抑癌基因的失活與癌基因的激活發揮了關鍵的作用。

長鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一類長度超過200nt、缺少特異完整的開放閱讀框、無或很少有蛋白編碼功能的RNAs分子。最近的研究表明，lncRNAs通過在表觀遺傳、轉錄和轉錄后水平廣泛調節基因的表達，它們參與了生物體生長、發育、衰老及死亡等重要生命活動的調控。越來越多的研究表明lncRNAs的異常表達或功能缺失與腫瘤的發生發展密切相關。一些lncRNAs分子在腫瘤的診斷和治療方面具有重要的意義，且可以作為腫瘤預后判斷新的分子標記。目前，已經克隆的人類lncRNAs基因已超過4萬多個，但絕大部分lncRNA的功能未知。

我們檢測了LINC00673在臨床離體腫瘤樣本中的表達水平，并分析了LINC00673表達水平與臨床病例資料的相關性。我們從口腔腫瘤及相對應的正常對照組織中抽提RNA后通過逆轉錄，實時定量PCR，檢測了LINC00673的表達情況，結果顯示LINC00673在口腔腫瘤組織中表達上調。我們隨后又利用原位雜交的方法，進一步在存檔石蠟樣本驗證了LINC00673在口腔腫瘤中表達顯著上調，因此針對LINC00673的檢測制劑可用于口腔腫瘤的輔助診斷，結合臨床回訪資料進行生存曲線分析發現LINC00673表達高的患者其生存時間短于該lncRNA表達低的患者，因此針對該lncRNA的檢測制劑也可以用于口腔腫瘤的預后判斷。

我們還針對該lncRNA基因的序列設計并合成了用于抑制LINC00673表達的小RNA干擾序列(siRNAs)，利用siRNAs在口腔腫瘤細胞系中抑制了LINC00673的表達，且發現抑制該lncRNA表達可抑制口腔腫瘤細胞的侵襲與遷移能力。因此針對該lncRNA的抑制制劑也具有口腔腫瘤基因治療的潛在用途。

發明內容

本發明的目的是提供lncRNA LINC00673的原位雜交探針的應用方法，利用檢測LINC00673的原位雜交探針可以制備用于口腔腫瘤輔助診斷或者預后預測的制劑。

本發明長鏈非編碼RNA LINC00673原位雜交探針的應用方法，用于制備口腔腫瘤輔助診斷或者療效預測的原位雜交檢測試劑，該長鏈非編碼RNA LINC00673的序列見SEQNO:1。

原位雜交檢測LINC00673表達的探針序列如下：

LINC00673探針1：

5’-GAAAAACCTCTTGCACCACCTTAGTCTCCAAAGA-3’；

LINC00673探針2：5’-CTTTCCTGTTCTTTCTCCTACCCTTCCTGACTAG-3’；

LINC00673探針3：5’-CATGAAGTAATAATAAAGGTTCCGCTTATCAACC-3’。