[發明專利]一種腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201610899293.0
• 申請日: 2016-10-14
• 公開（公告）號: CN107952080A
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 劉永東;張純;蘇志國
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟,侯桂麗

1.一種腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，其特征在于，所述腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物包括靶向多肽、長效多肽和藥物分子；

其中，所述靶向多肽通過柔性連接肽連接在長效多肽的C端形成融合肽，所述融合肽作為所述藥物分子的載體，所述藥物分子與融合肽中的長效多肽以化學鍵相連；

所述長效多肽為與人血清白蛋白具有親和相互作用的多肽或蛋白結構域。

2.根據權利要求1所述的腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，其特征在于，所述長效多肽的分子量為1-20kDa；

優選地，所述長效多肽的N末端的10個氨基酸中有半胱氨酸、賴氨酸或、非天然氨基酸中的任意一種或至少兩種的組合，優選半胱氨酸；

優選地，所述半胱氨酸的數量為1-3個；

優選地，所述賴氨酸的數量為0-3個；

優選地，所述非天然氨基酸的數量為0-3個；

優選地，所述長效多肽為鏈球菌G蛋白中與白蛋白結合結構域、抗白蛋白抗體抗原結合結構域或白蛋白中的任意一種或至少兩種的組合；

優選地，所述長效多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-4所示。

3.根據權利要求1或2所述的腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，其特征在于，所述靶向多肽為與腫瘤組織的過表達受體具有親合力的氨基酸序列配體；優選地，所述靶向多肽的氨基酸序列的結構通式為(R/K-X-Y-R/K)_n

其中，R為精氨酸，K為賴氨酸，X和Y為任意氨基酸，n為1-5范圍內的自然整數；

優選地，所述靶向多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5-12所示。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，其特征在于，所述靶向多肽通過柔性連接肽連接在長效多肽的C端組成長效多肽-靶向多肽的融合肽，所述長效多肽-靶向多肽通過多肽合成的方法和/或重組表達的方法獲得，優選為重組表達的方法獲得；

優選地，所述柔性連接肽的通式為(G_m-S)_i

其中，G為甘氨酸，S為絲氨酸，m和i獨立地選自1-10范圍內的自然整數；

優選地，所述融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.13-14所示；

優選地，所述融合肽的基因序列如SEQ ID NO.15-16所示。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，其特征在于，所述藥物分子為具有抑制作用和/或殺傷作用的小分子化合物；

優選地，所述藥物分子的分子量不超過2000Da；

優選地，所述藥物分子為多柔比星衍生物、單甲基澳瑞他汀D衍生物、單甲基澳瑞他汀E衍生物、單甲基澳瑞他汀F衍生物或美登素中的任意一種或至少兩種的組合。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，其特征在于，所述藥物分子與融合肽中的長效多肽以化學鍵相連，所述相連是通過長效多肽N端序列氨基酸殘基上的氨基和/或巰基形成穩定化學鍵進行連接；

優選地，所述N端序列氨基酸為N端的1-10個氨基酸；

優選地，所述的化學鍵為碳硫單鍵、硫硫單鍵或碳氮單鍵中的任意一種或至少兩種的組合。

7.根據權利要求1-5中任一項所述的腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)通過基因工程手段，將長效肽與靶向肽通過大腸桿菌工程菌進行融合表達，經過離子交換層析純化，獲得長效-靶向雙功能的融合肽；

(2)將融合肽溶于偏堿性緩沖溶液中，將藥物分子溶解于有機溶劑中，再將藥物分子逐滴加入融合肽溶液中，溫和攪拌，室溫避光反應，離心去除沉淀，得到偶聯粗產物；

(3)將步驟(2)得到的偶聯粗產物通過凝膠過濾層析法分離純化，去除未偶聯的小分子，得到本申請腫瘤靶向多肽-藥物偶聯衍生物，凍干保存。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述偏堿性緩沖溶液的pH為8.5-9.5；

優選地，步驟(2)所述的有機溶劑為N,N-二甲基甲酰胺和/或二甲基亞砜；

優選地，所述有機溶劑的體積分數為20-60％，優選為25-50％。