[發(fā)明專利]一種高效快速檢驗肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法

有效

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• 申請日: 2016-10-14
• 公開（公告）號: CN106613943B
• 公開（公告）日: 2018-04-10
• 發(fā)明（設計）人: 郭曄紅;杜弢;張琴玲
• 申請（專利權）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/02
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

技術領域

本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)經(jīng)濟作物育種技術領域，具體涉及一種高效快速檢驗肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法。

背景技術

肉蓯蓉作為中草藥在中國已有1800年的應用歷史，是我國稀有的名貴中藥材，有“沙漠人參”之美譽，是補腎壯陽的要藥。目前生藥市場上普遍使用的肉蓯蓉生藥有三種，分別為荒漠肉蓯蓉、管花肉蓯蓉和鹽生肉蓯蓉。肉蓯蓉是一種多年生的專一性根寄生植物，成熟肉蓯蓉種子的胚為球形原胚，發(fā)育簡單，無胚根、胚芽和子葉的分化，在自然條件下萌發(fā)需經(jīng)歷一定時間的形態(tài)后熟與生理后熟期后，才能解除休眠。由于肉蓯蓉種子存在復雜的休眠特性和特殊的根專性寄生生物學特性，導致自然萌發(fā)困難、發(fā)芽率極低。目前，野生肉蓯蓉資源匱乏，特別是藥用效果最好的荒漠肉蓯蓉，野生荒漠肉蓯蓉和寄主梭梭均處于瀕危境地，現(xiàn)為國家二級保護植物，被列入《中國植物紅皮書》。因此，人工栽培肉蓯蓉已經(jīng)成為我國西北地區(qū)發(fā)展經(jīng)濟作物，改善農(nóng)業(yè)種植結(jié)構(gòu)的重要途徑，將為當?shù)剞r(nóng)戶帶來可觀的經(jīng)濟效益。

雖然荒漠肉蓯蓉人工栽培面積在逐年擴大，但荒漠肉蓯蓉種子價格昂貴，一公斤種子價格高達3萬元左右，但由于荒漠肉蓯蓉種子萌發(fā)困難，市售的荒漠肉蓯蓉種子摻假現(xiàn)象嚴重。但是目前還沒有快速檢驗肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法，常規(guī)發(fā)芽實驗的方法并不適用于肉蓯蓉種子，因為常規(guī)發(fā)芽方法處理下，肉蓯蓉種子發(fā)芽率較低，發(fā)芽時間過長，不能快速準確地得出肉蓯蓉種子的質(zhì)量數(shù)據(jù)，沒有數(shù)據(jù)支持的肉蓯蓉種子給農(nóng)戶帶來巨大的生產(chǎn)隱患。

近些年，國內(nèi)外的科研工作者針對打破肉蓯蓉種子休眠開展了一些研究，采用的方法多種多樣，比如：歐陽杰等采用50℃高溫預處理肉蓯蓉種子，誘導種子形成愈傷組織；牛東玲等通過溫水處理、變溫以及外源GA₃預處理，可以使肉蓯蓉種子萌發(fā)率達到16.7％；盛晉華等對肉蓯蓉種子經(jīng)過2～5℃低溫層積處理,發(fā)現(xiàn)種子內(nèi)源激素GA₃含量逐漸增加，ABA含量逐漸降低，最高發(fā)芽率17.8％；盛晉華研究發(fā)現(xiàn)氟啶酮能夠打破荒漠肉蓯蓉種子休眠，采用該法荒漠肉蓯蓉發(fā)芽率最高可達52.5％，發(fā)芽延續(xù)時間約30天左右。雖然這些方法在一定程度上打破了肉蓯蓉種子的休眠，但是發(fā)芽率依然偏低且不穩(wěn)定，而且發(fā)芽時間偏長，就算在最理想狀態(tài)下，管花肉蓯蓉發(fā)芽率最高能達75％，荒漠肉蓯蓉發(fā)芽率最低，為16.7％-52.5％，直到30d才能統(tǒng)計發(fā)芽率。現(xiàn)有的方法不便于種子質(zhì)量檢驗，嚴重影響肉蓯蓉種子市場流通，增加農(nóng)戶種植的風險。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提出一種高效快速檢驗肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法，旨在為提出一種能夠顯著提高肉蓯蓉種子發(fā)芽率、縮短發(fā)芽時間、為肉蓯蓉種子質(zhì)量檢驗和栽培提供技術支撐的檢驗方法。

本發(fā)明提供的高效快速檢驗肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法，包括如下步驟：

1)溫水浸種：將肉蓯蓉種子首先在25-40℃溫水中浸泡3-5h；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在20-30℃條件下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡24-48h，然后蒸餾水沖洗干凈備用；

3)配制培養(yǎng)基：配制1/2MS專用培養(yǎng)基或大量元素專用培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基分裝至已滅菌的培養(yǎng)皿中備用；

4)種子消毒：在超凈工作臺上將步驟2)沖洗干凈的種子用消毒劑進行消毒，并用無菌蒸餾水沖洗干凈；

5)種子置床：采用無菌操作技術將步驟4)消毒好的種子置于步驟3)已制備好的培養(yǎng)皿上，每個培養(yǎng)皿置30-80粒種子；

6)發(fā)芽：將步驟5)種子已置床的培養(yǎng)皿置于25℃進行發(fā)芽。

進一步，所述1/2MS專用培養(yǎng)基的配制方法為，采用MS培養(yǎng)基配方為基礎，將其中所有無機鹽的濃度都減半，配制出1/2MS基礎培養(yǎng)基，然后加入占1/2MS基礎培養(yǎng)基重量3％的蔗糖，調(diào)整pH值為5.8，再加入占1/2MS基礎培養(yǎng)基重量0.8％的瓊脂，攪拌均勻后高壓濕熱滅菌，獲得1/2MS專用培養(yǎng)基。

進一步，所述大量元素專用培養(yǎng)基包含的組分為KNO₃、NH₄NO₃、MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄，其濃度分別為950mg/L、825mg/L、185mg/L、85mg/L，將上述四種組分按相應濃度混合，調(diào)整pH值為5.8，加入占培養(yǎng)基重量0.8％的瓊脂，攪拌均勻后高壓濕熱滅菌，獲得大量元素專用培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述溫水浸種步驟中，將肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h。