[發(fā)明專利]一種高效動物肌腱粉碎方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610893946.4
• 申請日: 2016-10-11
• 公開（公告）號: CN107913785A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 彭新生;張智武;陳新亮;吳文靜;許新佳;周艷芳;崔碧玲
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江崇山生物制品有限公司
• 主分類號: B02C21/00
• 分類號: B02C21/00;C07K14/78;C07K1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)、醫(yī)療器械、日用化工技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及動物肌腱粉碎方法方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

膠原蛋白廣泛存在于肌腱、韌帶、軟骨、皮膚、牙齒等動物結(jié)締組織中，起著支撐器官，賦予組織機械強度，對細(xì)胞的分化、運動化趨向、結(jié)締組織的修復(fù)起著重要作用。膠原蛋白以其天然的止血、低毒性、低抗原性、低免疫性、能引導(dǎo)細(xì)胞再生和與人體相容性較好等優(yōu)點，而廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)材料和臨床醫(yī)。

由于肌腱組織韌性強，不作特殊處理，切片與粉碎困難，直接影響膠原蛋白的提取效率。由于跟腱類來源于動物，有少量油脂類存在，易產(chǎn)生乳化，不利于膠原蛋白的純化處理。可采用丙酮、乙醇、正丁醇浸泡除脂，但操作方法繁瑣、易污染環(huán)境、有機溶劑殘留等缺陷。

經(jīng)多次研究觀察，采用冷凍切片法易于將跟腱切成薄片，采用氯化鈉溶液濕法粉碎法可以高效地將跟腱粉碎成所需的各類粒徑大小的跟腱類粉末；此外，采用氯化鈉溶液濕法粉碎法可以有效地將跟腱中的油脂除去。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有跟腱粉碎技術(shù)中的不足之處而提供一種高效粉碎技術(shù)，該粉碎技術(shù)節(jié)能、環(huán)保。本發(fā)明的目的也在于針對跟腱中的油脂除去而提供簡便易行的除去方法，適宜于工業(yè)化大生產(chǎn)。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)。

有效粉碎動物跟腱及除去跟腱中油脂的方法，主要包括以下步驟：

步驟一，將富含膠原蛋白的動物跟腱機械去除筋膜、肌肉和脂肪后，用水或氯化鈉溶液漂洗干凈，冷凍。

步驟二，取出冷凍硬化后的動物跟腱，用刀片刮去跟腱表面的殘余筋膜，用切片機將跟腱切成薄片。

步驟三，將跟腱類薄片卷成條狀，冷凍變硬后再切薄片；

步聚四，將跟腱類薄片放入到一定濃度的氯化鈉溶液，用粉碎機或研磨機粉碎，即得跟腱類混懸液。

步驟五，將跟腱類混懸液離心，棄去鹽液，水洗殘渣，離心，得粉碎后的跟腱類粉末。

上述方案中，在所述步驟五后，可將粉碎后的跟腱粉末常溫干燥、減壓干燥、冷凍干燥后包裝，入庫。也可將上述制備的膠原粉末經(jīng)Co⁶⁰照射滅菌，然后包裝，入庫。

上述方案中，所述步驟一中，動物跟腱包括牛跟腱、豬跟腱、羊跟腱和馬跟腱等任何動物跟腱中的任意一種或兩種以上的組合物。

上述方案中，所述步驟一中冷凍為零攝氏或零攝氏度以下冷凍，常見的為冰箱或冰柜零攝氏度冷凍、零下10攝氏度冷凍、零下20攝氏度冷凍、零下50攝氏度冷凍、零下80攝氏度冷凍。

上述方案中，所述步驟一中冷凍為零攝氏或零攝氏度以下冷凍，也包括采用一些特殊液體或氣體冷凍方法，如采用液氮快速冷凍方法。

上述方案中，所述步驟一中冷凍為零攝氏或零攝氏度以下冷凍，冷凍時間可長可短，達(dá)到所需切片的硬度即可。

上述方案中，所述步驟二中刀片為手術(shù)刀片或市場上所能見到的任何鋒利器具。

上述方案中，所述步驟四中，氯化鈉溶液的濃度可達(dá)到過飽和濃度，常用的為0.9％的濃度。

上述方案中，所述步驟五中，將跟腱類混懸液離心，離心指的是使用各種離心機、冷凍離心機，其離心速度從速100rpm到20000rpm以上均可。

上述方案中，所述步驟五中，棄去鹽液，水洗殘渣，離心，得粉碎后的跟腱類粉末。水洗的程度可以用硝酸銀溶液滴定水液，如產(chǎn)生氯化銀絮狀沉淀，則表示脫鹽不干凈，需要繼續(xù)清洗。

上述方案中，所述步驟五中，棄去鹽液，得粉碎后的跟腱類粉末。如果沒有離心機，也可直接采用過濾的程序，再經(jīng)適宜的方法進(jìn)行干燥，得到所需的跟腱類粉末。

本發(fā)明的有益效果：生產(chǎn)成本低，勞動強度小，不污染環(huán)境，適宜于工業(yè)化生產(chǎn)；所制備的膠原粉末或混懸液有利于膠原蛋白的提取，并制備成以膠原蛋白為原材料的各種醫(yī)療器械、制劑、日化產(chǎn)品。

附圖說明

圖1是本發(fā)明所提供的制備方法中所制備的跟腱粉末

圖2是利用本發(fā)明制備的跟腱粉末經(jīng)提取后所制備的膠原蛋白海綿(實驗室小試樣品)

圖3是利用本發(fā)明制備的跟腱粉末經(jīng)提取后所制備的膠原蛋白海綿(車間中試放大生產(chǎn)所得樣品)

圖4是利用本發(fā)明制備的跟腱粉末經(jīng)提取后所制備的膠原蛋白液

圖5是利用本發(fā)明制備的跟腱粉末經(jīng)提取后所制備的膠原蛋白敷料

圖6是利用本發(fā)明制備的牛跟腱粉末經(jīng)提取后所得到的的膠原蛋白溶液的凝膠蛋白電泳圖

具體實施方式