[發明專利]復合微生物制劑高效降解黃曲霉毒素B1的制備方法

在審

• 申請號: 201610887308.1
• 申請日: 2016-10-12
• 公開（公告）號: CN107937357A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 王樂;黃巍;武大鵬;胡元森;張蘭
• 申請（專利權）人: 河南工業大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N9/00;C12P1/02;C12P1/04;A23K10/16;A23K10/14;C12R1/32;C12R1/40;C12R1/845
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技術領域

本發明屬于微生態制劑領域，具體涉及一種高效降解黃曲霉毒素B1的復合微生物制劑的制備方法。

背景技術

黃曲霉毒素是真菌的次級代謝產物，主要由黃曲霉、寄生曲霉等產生。最典型的是黃曲霉毒素B1，其具有很強的致癌、致畸和致突變作用，危害人類和動物的健康。黃曲霉毒素的泛濫會給全世界帶來巨大的經濟損失。目前采用物理方法以及化學方法處理黃曲霉毒素存在很多缺陷，比如去除黃曲霉毒素不徹底，在處理過程中產生副產物，處理過后的產品品質下降以及處理中發生其他的污染等。生物法降解黃曲霉毒素成為了當今的熱點。據報道當前已經有很多微生物能夠對黃曲霉毒素進行降解作用，其中一部分是能夠降解黃曲霉毒素的真菌和細菌產生酶的作用效果。

國內外已報道的能夠降解黃曲霉毒素B1的微生物可以分為真菌生物以及細菌生物兩個大類，據報道孢霉能夠生化降解黃曲霉毒素B1環戊烷環上的酮羰基。黃曲霉毒素B1同樣可被少根根霉生物降解成異構羥基化合物。細菌降解黃曲霉毒素B1的報道也很多，研究認為解毒作用多源于胞外代謝產物。國內外對降解黃曲霉毒素B1的細菌進行了大量研究，比如分支桿菌、紅串紅球菌、橙色黃桿菌、枯草芽孢桿菌、橙紅色黏球菌等等。王寧等對橙紅色粘球菌的培養基和發酵產酶條件進行優化，在最佳發酵條件下粘球菌對黃曲霉毒素B1的降解率達到78.2%。中國農業大學動物營養國家重點實驗室從動物腸道分離出1株枯草芽胞桿菌，其發酵液能同時降解溶液中的黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素G1和黃曲霉毒素M1達80%以上。生物法降解黃曲霉毒素B1以其降解率高、污染小的優越性逐漸被越來越多的研究人員所重視。但是生物法降解黃曲霉毒素B1主要是以一株菌及其產物進行的，以不同的種類的菌株發酵生產液進行處理，將處理之后的提取液以不同的組分百分比結合在一起發揮共同降解作用的研究甚少。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高效降解黃曲霉毒素B1的復合微生物制劑的制備方法。

本發明采用的分支桿菌、惡臭假單胞菌、少根根霉來自于本實驗室保藏。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種高效降解黃曲霉毒素B1的復合微生物制劑：由分支桿菌提取液、惡臭假單胞菌提取液以及少根根霉的提取液按照任意兩種提取液或者三種提取液各自按照一定的組分百分比混合而成。

進一步在制備復合微生物制劑時，由分支桿菌提取液、惡臭假單胞菌提取液以及少根根霉的提取液以任意兩者提取液混合，保證兩者各自所占組分百分比在區間20%～80%以內，并且兩組分之和為100%。

進一步在制備復合微生物制劑時，由分支桿菌提取液、惡臭假單胞菌提取液以及少根根霉的提取液三者混合而成時，保證三者各自所占組分百分比在區間20%～60%以內，并且三組分百分比之和為100%。

本發明高效降解黃曲霉毒素B1的復合微生物制劑的制備方法包括以下步驟：

（1）分別發酵培養分支桿菌、惡臭假單胞菌以及少根根霉，將三者的發酵液分裝在離心管中，8000rpm離心20分鐘，將上清液與下層菌體分開，將菌體于冰浴下超聲波破碎，破碎之后，將之前分離的上清液再次加入到破碎后的細胞溶液當中，充分攪拌并混合均勻之后，再經過8000rpm離心20分鐘，取離心后的上清液通過0.22μm的濾膜過濾，得到分支桿菌、惡臭假單胞菌以及少根根霉的提取液。

（2）將上述分支桿菌提取液、惡臭假單胞菌提取液以及少根根霉提取液任意兩種混合制成復合微生物制劑，其中兩種提取液都滿足所占組分百分比在區間20%～80%以內，并且兩組分之和為100%。將上述分支桿菌提取液、惡臭假單胞菌提取液以及少根根霉提取液三者混合制成復合微生物制劑，其中三種提取液都滿足所占組分百分比在區間20%～60%以內，并且三組分之和為100%。

本發明之一種提升黃曲霉毒素B1降解效率20%以上的方法，其中，將上述分支桿菌提取液、惡臭假單胞菌提取液以及少根根霉提取液三者混合制成復合微生物制劑，其中三種提取液都滿足所占組分百分比在區間20%～60%以內，并且三組分之和為100%。之后將此復合微生物制劑進行超濾濃縮，濃縮之后使其作用于黃曲霉毒素B1時，控制其在降解黃曲霉毒素B1的溫度為35℃～37℃，PH為5.5～6.5。

進一步，在步驟（11）中，將復合微生物制劑進行超濾濃縮，濃縮之后使其作用于黃曲霉毒素B1時，控制其在降解黃曲霉毒素B1的溫度為36℃，PH為6.5。