[發(fā)明專利]一種抗PRRSV的microRNA樣病毒小RNA序列及其用途和檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610866123.2
• 申請日: 2016-09-29
• 公開（公告）號: CN106399313B
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖書奇;周恩民;李娜
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/6883
• 代理公司: 北京匯信合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 吳甘棠

本發(fā)明公開了一種抗PRRSV的microRNA樣病毒小RNA序列及其用途和檢測方法。本發(fā)明公布了該P(yáng)RRSV?vsRNA1的成熟體序列以及編碼PRRSV?vsRNA1的前體序列和二級結(jié)構(gòu)。本發(fā)明通過不同方法驗(yàn)證了此PRRSV?vsRNA1在PRRSV感染的豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAMs)及對于PRRSV高致病性毒株具有抑制作用。本發(fā)明闡明了抗PRRSV的PRRSV?vsRNA1可以特異性靶向PRRSV病毒非結(jié)構(gòu)蛋白2(Nsp2)，從而具有抑制PRRSV在PAMs細(xì)胞中增殖的功能。本發(fā)明涉及的PRRSV?vsRNA1有望成為一種防治豬藍(lán)耳病的藥物，為PRRSV的防控提供有效的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗PRRSV的microRNA樣病毒小RNA序列及其用途和檢測方法，具體涉及一種來源于豬繁殖與呼吸綜合征病毒基因組的microRNA樣病毒小RNA的鑒定以及在抗PRRSV中的應(yīng)用，本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)感染引起的一種嚴(yán)重危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒性傳染病，其主要特征為妊娠母豬流產(chǎn)、死產(chǎn)、弱胎、木乃伊胎等繁殖障礙、各年齡階段豬的呼吸道癥狀。由于PRRS病毒具有抗原變異性、嗜巨噬細(xì)胞性、抗體依賴性增強(qiáng)作用(ADE)和持續(xù)性感染等特征，現(xiàn)有疫苗對該病的保護(hù)作用有限，目前還沒有抗PRRS病毒的特效藥物。

microRNA是一類小的單鏈非編碼RNA，其在病毒與宿主的相互作用中發(fā)揮著極其重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。一方面，病毒感染能夠?qū)е滤拗骶幋a的microRNA表達(dá)水平的改變，后者通過靶向病毒或者自身的基因，對病毒生命過程的諸多環(huán)節(jié)進(jìn)行調(diào)控。另一方面，許多病毒同樣可以編碼microRNA調(diào)節(jié)宿主及病毒自身基因的表達(dá)，在病毒感染宿主細(xì)胞的過程中發(fā)揮重要作用。

已有研究證實(shí)在PRRSV感染宿主細(xì)胞的過程中，宿主編碼的microRNA對于PRRSV的感染扮演重要調(diào)控作用。而PRRSV編碼的microRNA迄今并無相關(guān)的報(bào)道，本發(fā)明探索并鑒定了一種來源于病毒基因組的microRNA樣病毒小RNA(PRRSV-vsRNA1)，能夠通過調(diào)節(jié)自身基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控病毒復(fù)制和增殖，這為深入了解PRRSV感染過程中病毒與宿主的相互作用以及PRRSV病毒的防控提供了全新的視角和策略。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種抗PRRSV的microRNA樣病毒小RNA序列及其用途和檢測方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的上述缺點(diǎn)和不足。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供鑒定來源于PRRSV的病毒小RNA的方法以及檢測其作用機(jī)制。

本發(fā)明提供了源于PRRSV的病毒小RNA的sense鏈序列：UGCUGACUUGGCGCAACACGU。

本發(fā)明提供了源于PRRSV的病毒小RNA的前體序列：GUGAUGCGUCCAAGCUUAGUGAUCCUGCUACGCAGGAGUGGCUCUCUCGCAUGUGGGAUAGGGUUGACAUGCUGACUUGGCGCAACACGU。

本發(fā)明提供了預(yù)測microRNA樣病毒小RNA的二級結(jié)構(gòu)以及最小結(jié)合自由能(MFE)的生物信息學(xué)方法。

本發(fā)明提供了鑒定病毒小RNA所調(diào)控靶基因的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測方法。

本發(fā)明通過體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)所提供的病毒小RNA具有抑制PRRSV復(fù)制的特性能夠用于開發(fā)新型抗PRRSV藥物。

本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題，可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種抗PRRSV的microRNA樣病毒小RNA序列，即PRRSV-vsRNA1，其特征在于，其核苷酸序列編碼的RNA序列與SEQ ID NO.1相同。