[發(fā)明專利]熒光免疫層析測試數(shù)據(jù)處理方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610858688.6
• 申請日: 2016-09-27
• 公開（公告）號: CN107389625B
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王佩瑞;李歡;倪曉濤;陸亮;肖琨;周亦迪;曹秋岑
• 申請（專利權(quán)）人: 上海艾瑞德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/58;G01N33/558
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐嘉慧;陳詳

本發(fā)明提供了一種熒光免疫層析測試數(shù)據(jù)的處理方法，包括提供一免疫層析試紙條、一激發(fā)光源和一受激光讀取裝置，通過所述控制裝置，控制光斑從而使得所述光斑沿所述層析試紙條的長度方向進(jìn)行移動，將對應(yīng)于有效光斑的各信號強度進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，從而獲得免疫層析試紙的檢測結(jié)果。本發(fā)明方法排除了質(zhì)控線上引入的批次間樣品損失量、批次間加樣量差異、抗體標(biāo)記過程中的部分干擾因素等，使得最終的數(shù)據(jù)結(jié)果具有合理的物理意義和更高的靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于檢測領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種熒光免疫層析測試數(shù)據(jù)優(yōu)化處理方法。

背景技術(shù)

在色譜分析、原子吸收、核磁等領(lǐng)域，參照檢測儀器的線性范圍和靈敏度，選用峰高和峰面積都可以用作精準(zhǔn)的定量方法。

現(xiàn)有熒光免疫層析測試數(shù)據(jù)處理技術(shù)中，樣本數(shù)據(jù)的處理方式多采用TY、TA、TAP進(jìn)行比較計算，其中TY表示光斑與測試線相交的陰影部分面積反饋的最大信號值，即圖2(d)中完整信號峰的峰高值，其包含了傳統(tǒng)意義上部分峰面積的物理含義，單純選用TY作為樣品間性能比較的參數(shù)，難以區(qū)分樣品間的差異。TA、CA分別表示現(xiàn)有譜圖中測試線和質(zhì)控線上的信號峰的積分面積，其物理意義是將圖2中光斑與測試線、質(zhì)控線相交的陰影部分面積反饋的信號進(jìn)行積分加和，因此在TA和CA的計算中部分測試線和質(zhì)控線上的局部熒光信號區(qū)會在光斑移動前后被重復(fù)計算多次(約20次)，因此將TA、TAP應(yīng)用于比較樣品間的性能差異，物理意義很不明確。

另外，在進(jìn)行樣品熒光層析測試時，由于熒光微球的添加量較少(約為0.3-0.4μL)，在加樣時容易因為微球附著于槍頭而產(chǎn)生批次間添加量的誤差，或是在制備過程中樣品批次間損失率不一致，使得最終添加的微球總量存在差異。雖然微球在測試時是過量的，當(dāng)批次間添加量不同時，微球與測試線上的結(jié)合量基本一致，即測試線上的信號峰受該因素干擾相對較小，但與質(zhì)控線上的結(jié)合量卻存在較大的差異，即質(zhì)控線上的信號峰受該因素的干擾相對較大。此時若將質(zhì)控線上的信號峰數(shù)據(jù)引入結(jié)果中進(jìn)行計算處理，就會使得批次間樣品的差異變大，降低了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可比性。

在側(cè)向流層析測試過程中，當(dāng)熒光微球分散均一性不佳時，微球容易在層流過程中堆積在測試線或質(zhì)控線的某一側(cè)(圖3b)，使得熒光測試儀輸出的信號峰不是理想的高斯分布，對稱性不佳(圖3c，樣本B)，因此單純用樣本A和樣本B測試線或質(zhì)控線上的某處信號值、輸出信號峰的峰高值(TY、CY)或峰面積值(TA、CA)進(jìn)行比較均不合適。同時，將抗體標(biāo)記于微球上時，會由于抗體添加量少或是微球曲率較小而使得抗體的二級結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，抗體上的結(jié)晶片段(Fragment Crystalline，F(xiàn)c)容易暴露，表現(xiàn)出對質(zhì)控線的結(jié)合能力變強，CY(質(zhì)控線上信號峰的峰高值)、CA變大；而當(dāng)抗體添加量較多時，抗體在微球表面發(fā)生飽和偶聯(lián)，抗體Fc端與質(zhì)控線上抗體結(jié)合時的空間位阻變大，表現(xiàn)出對質(zhì)控線的結(jié)合能力變?nèi)酰珻Y、CA變小。這些影響CY、CA數(shù)據(jù)的因素都會干擾TAP的結(jié)果。

熒光免疫層析測試儀產(chǎn)生熒光信號峰與其他色譜峰中峰高和峰面積的含義有所不同，其對應(yīng)的峰高值(TY)隱含了少部分峰面積的物理含義，直接采用峰高和峰面積進(jìn)行數(shù)據(jù)處理來表示樣品的最高信號強度和總信號強度并不合適；另外現(xiàn)有儀器選用質(zhì)控線進(jìn)行定量計算，引入了質(zhì)控線上的干擾因素，容易產(chǎn)生較大的批次間誤差。

綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要研發(fā)出一種物理意義明確，并且能夠直觀反映樣品最高信號強度和總信號強度的數(shù)據(jù)處理方式，同時排除質(zhì)控線上伴隨著的批次間樣品損失量、批次間加樣量差異、抗體標(biāo)記過程中的部分干擾因素等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種熒光免疫層析測試數(shù)據(jù)處理方法及其應(yīng)用。

本發(fā)明的第一方面，提供一種熒光免疫層析測試數(shù)據(jù)的處理方法，包括步驟：

(1)提供一免疫層析試紙條、一激發(fā)光源和一受激光讀取裝置，其中，

所述激發(fā)光源用于產(chǎn)生激發(fā)光，所述激發(fā)光被照射在所述層析試紙條上，從而形成光斑；