[發明專利]一種基于組織培養的快速繁育鐵筷子的方法

在審

• 申請號: 201610854432.8
• 申請日: 2016-09-27
• 公開（公告）號: CN107864855A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 李霖;金夢怡;陳建華;黃建榮;龐玉華
• 申請（專利權）人: 上海上房園藝有限公司;上海上房園林植物研究所有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司31225
• 代理人: 褚明偉

技術領域

本發明涉及一種植物快速繁育方法，尤其是涉及一種基于組織培養的快速繁育鐵筷子的方法。

背景技術

鐵筷子為毛茛科鐵筷子屬植物，多年生常綠草本，葉片腎形或五角形，雞足狀三全裂，莖生葉近無柄，基生葉片較小。花朵生莖或枝端，在基生葉剛抽出時開放，無毛；萼片初粉紅色，在果期變綠色。花期3月-4月，果期5月。鐵筷子因其花型獨特，早春開花，病蟲害少，耐蔭性強，可大面積種植，是林下地被植物的優良材料。鐵筷子作為鄉土優良園林植物，因其觀賞性、抗逆性、新穎性逐漸受到大家的認可，在園林綠化中大量的使用。

同時公開號為CN103599145B的中國專利介紹了鐵筷子藥材乙醇提取浸膏中乙酸乙酯萃取部位有較好的鎮痛和抗炎作用，可將其用于制備抗炎鎮痛的藥物。公開號為CN104997818A的中國專利公開了鐵筷子總皂苷在保護肝臟功能上的新用途。因此，鐵筷子具有許多的藥用價值。

鐵筷子可播種繁殖和分株繁殖，鐵筷子的種子具有休眠特性，夏季收取成熟種子后立即播種或經過普通干藏后播種，發芽率均低于20％。需經過種子自然落于地面，受落葉覆蓋，冬季低溫及雨雪浸潤等過程使種子通過后熟，達到可萌發的營養狀態才可萌發，發芽率較低，且其分株慢，市場需求量大，種苗供應受限制。

因此，目前需求一種能夠快速繁育鐵筷子的方法，以滿足目前對于鐵筷子的需求量。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種基于組織培養的快速繁育鐵筷子的方法。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

一種基于組織培養的快速繁育鐵筷子的方法，包括以下步驟：

(1)培養基的配制，包括組培各階段培養基的組分和含量：

1.1、芽誘導培養基：MS+BA 1-5mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L；

1.2、不定芽增殖培養基：MS+6-BA 1.0-3.0mg/L+NAA 0.1-0.3mg/L；

1.3、壯苗培養基：MS+6-BA 0.5-1.5mg/L+NAA 0.1-0.2mg/L；

1.4、生根培養基：MS+NAA 0.1-0.3mg/L+IBA 0.1-0.3mg/L；

上述各種培養基的pH5.8，加入蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，培養溫度為22±1℃，光照為1900-2100Lx；

(2)鐵筷子的組織培養：

2.1、無菌材料的獲得

鐵筷子在春季3月挖取地上部分的小芽，用自來水沖洗1h后于超凈工作臺上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，無菌水沖洗5-6次，無菌濾紙吸干表面水份，取小芽基部切成1cm長，接種于芽誘導培養基上；

2.2、芽的分化和增殖

小芽接種于誘導培養基上30天后，小芽基部開始膨大，再培養25天可見明顯的愈傷組織；繼續培養30天，切下帶小芽愈傷組織放入不定芽增殖培養基上培養；

2.3、不定芽壯苗培養

在不定芽增殖培養基上，誘導出的叢生芽每叢只有2-3小芽可以伸長，其余處于矮化狀態，分成小叢或單球后，放入壯苗培養基，不定芽迅速伸長，20天后可以長到2-3cm；

2.4、生根培養

取1-2cm的小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，25天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，35天后可以長至1-2cm；

2.5、煉苗與移栽

生根培養28-32天后，根系長至2-3cm時，選擇根系發達生長健壯的無菌苗，室內開瓶煉苗3天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化煉苗40天后，即移栽室外，給予肥水管理，移栽成活率為88％。

作為優選，所述的芽誘導培養基的組分和含量為：MS+BA 3mg/L+NAA 0.3mg/L，或MS+BA 5mg/L+NAA 0.5mg/L。

作為優選，所述的不定芽增殖培養基的組分和含量為：MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.2mg/L。該培養基條件下繁殖率最高，基部愈傷組織比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速，無玻璃化現象，在該培養中生長發育良好。

作為優選，所述的壯苗培養基的組分和含量為：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L。在該培養基下芽粗壯，繁育良好。

作為優選，所述的生根培養基的組分和含量為：MS+NAA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L。在該培養基下，根系粗壯，須根眾多，生根率為95％。